第14卷第2期食品安全质量检测学报Vol.14No.22023年1月JournalofFoodSafetyandQualityJan.,2023基金项目:国家重点研发计划项目(2019YFC1605400)Fund:SupportedbytheNationalKeyResearchandDevelopmentProgramofChina(2019YFC1605400)*通信作者:董雨豪,博士,副研究员,主要研究方向为水产病原菌检测及致病机制研究。E-mail:dongyuhao@njau.edu.cn*Correspondingauthor:DONGYu-Hao,Ph.D,AssociateProfessor,NanjingAgriculturalUniversity,No.1,Weigang,XuanwuDistrict,Nanjing210095,China.E-mail:dongyuhao@njau.edu.cn多重聚合酶链式反应技术检测罗非鱼5种常见食源性致病菌杨亚琨,刘永杰,董雨豪*(南京农业大学动物医学院,南京210095)摘要:目的建立一种可同时检测无乳链球菌(Streptococcusagalactiae)、嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)、霍乱弧菌(Vibriocholerae)、大肠杆菌(Escherichiacoli)和沙门菌(Salmonella)5种罗非鱼常见食源性致病菌的多重聚合酶链式反应(polymerasechainreaction,PCR)方法。方法根据5种致病菌特异性基因片段设计并合成引物,优化多重PCR体系条件,并对多重PCR体系的特异性、灵敏度以及人工模拟样品进行检测。结果建立的多重PCR方法可同时扩增5种目的菌株的特异性条带,且不与非靶标细菌发生交叉反应。敏感性实验结果显示,该方法对无乳链球菌、嗜水气单胞菌、沙门菌、霍乱弧菌、大肠杆菌纯培养物基因组DNA的检出限均为0.4ng/μL。人工模拟样品检测结果显示,该方法可以快速且准确地检测上述5种食源性致病菌,且检出限可达到2×101CFU/g。结论本研究建立了一种可同时检测无乳链球菌、嗜水气单胞菌、霍乱弧菌、大肠杆菌和沙门菌5种罗非鱼常见食源性致病菌的多重PCR检测方法。该方法的建立为罗非鱼常见食源性致病菌的快速检测提供了重要的技术手段。关键词:罗非鱼;食源性致病菌;多重聚合酶链式反应;快速检测Determinationof5kindsofcommonfoodbornepathogensinOreochromisniloticusbymultiplexpolymerasechainreactiontechnologyYANGYa-Kun,LIUYong-Jie,DONGYu-Hao*(CollegeofVeterinaryMedicine,NanjingAgriculturalUniversity,Nanjing210095,China)ABSTRACT:ObjectiveToestablishamethodforsimultaneousdeterminationof5kindsofcommonfoodbornepathogensinOreochromisniloticus,includingStreptococcusagalactiae,Aeromonashydrophila,Vibriocholerae,EscherichiacoliandSalmonellabymultiplexpolymerasechainreaction(PCR).Meth...
