解放军医学杂志2023年11月28日第48卷第11期论著基础研究经外泌体释放的高迁移率族蛋白B1在菌群紊乱非酒精性脂肪性肝病小鼠中的表达及Toll样受体4信号的调控作用孙焕焕，李培杰，冯云，刘梦莹，师文，马富权，和水祥*西安交通大学医学院第一附属医院消化内科，陕西西安710061[中图分类号]R575.1[文献标志码]A[DOI]10.11855/j.issn.0577-7402.2484.2023.0804[声明]本文所有作者声明无利益冲突[引用本文]孙焕焕,李培杰,冯云,等.经外泌体释放的高迁移率族蛋白B1在菌群紊乱非酒精性脂肪性肝病小鼠中的表达及Toll样受体4信号的调控作用[J].解放军医学杂志,2023,48(11):1314-1320.[收稿日期]2022-11-30[录用日期]2023-03-08[上线日期]2023-08-04[摘要]目的探讨非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)小鼠中肠源性及肝源性高迁移率族蛋白B1(HMGB1)经外泌体的释放情况及其调控途径。方法15只雄性8周龄野生型C57BL/6J小鼠及10只合并肠道菌群紊乱的NAFLD小鼠(ASC-/-)模型。10只野生型小鼠喂食正常饲料(ND)为正常对照组、喂养高脂饮食(HFD)为高脂饮食组，每组5只，另外5只用于了解造模情况。10只ASC-/-小鼠分别喂养ND(菌群紊乱组)及HFD(高脂菌群紊乱组)，每组5只。共喂养8周。采用共聚焦显微镜检测肝脏及肠黏膜外泌体标志物与HMGB1共定位情况；采用Westernblotting及PCR等方法检测外泌体中HMGB1含量。通过棕榈酸(PA)及脂多糖(LPS)处理AML12细胞24h构建体外模型，采用Westernblotting检测HMGB1/CD63水平，并通过siRNA干预探讨经外泌体释放的调控机制。结果高脂饮食组的外泌体分泌较正常对照组增多[(3.5±0.2)ng/mlvs.(1.1±0.3)ng/ml，P<0.05]，高脂菌群紊乱组的外泌体亦高于菌群紊乱组[(3.2±0.2)ng/mlvs.(1.9±0.4)ng/ml，P<0.05]。免疫荧光检测结果显示，体内实验高脂饮食组与正常对照组比较，体外实验高脂内毒素组与空白对照组比较，外泌体标记物(ALP或VPS16)与HMGB1的共定位增加。PCR检测发现，高脂饮食组肝细胞外泌体中的HMGB1较正常对照组升高(41.5±10.2vs.1.3±0.3，P<0.05)，高脂菌群紊乱组较菌群紊乱组升高(48.6±7.2vs.1.5±0.5，P<0.05)；高脂饮食组TLR4较正常对照组升高(13.8±6.2vs.2.8±0.9，P<0.05)，高脂菌群紊乱组较菌群紊乱组升高(22.6±4.1vs.2.5±1.5，P<0.05)。在肠黏膜细胞中，高脂饮食组较正常对照组(0.6±0.2vs.0.4±0.1，P<0.05)及高脂菌群紊乱组较菌群紊乱组(0.9±0.2vs.0.5±0.1，P<0.05)中HMGB1与外泌体标记物(CD63)共显影增加。在体外实验中...
