研究论文莱茵衣藻IFT20的原核表达、纯化及多克隆抗体鉴定贾瑞勤1，贾航²，郑学超²，薛斌23，葵（1.天津科技大学食品营养与安全国家重点实验室，天津300457；2.天津科技大学生物工程学院，天津300457；3.天津科技大学大健康生物技术国家国际科技合作基地，天津300457）摘要：莱菌衣藻鞭毛内运输（intraflagellartransport，IFT)蛋白IFT20是IFT蛋白复合物B(IFT-B)的组分之一。虽然IFT20参与调控细胞内大分子的胞内运输过程，但其作为一个鞭毛蛋白在鞭毛内的详细功能仍有待研究。为了开发高特异性的莱菌衣藻IFT20免源多克隆抗体，作者首先在大肠杆菌中表达了N端6xHis标签标记的IFT20融合蛋白（6xHis:IFT20），并对其进行镍柱纯化，将纯化所得6xHis:IFT20蛋白免疫新西兰大白免。采集3次免疫后的抗血清，利用间接ELISA法测定其效价为1:102400。利用proteinA纯化珠对所得抗血清进行了IgG亚型抗体富集，接着用大肠杆菌表达纯化所得N端MBP标签标记的IFT20（MBP:IFT20），并对IgG抗血清进行抗原抗体亲和纯化。经对CC-125藻种全细胞蛋白质提取物进行免疫印迹法鉴定，所得IFT20多克隆抗体特异性较高，适合用于后续莱菌衣藻IFT20鞭毛内运输功能的研究。关键词：莱茵衣藻；鞭毛内运输；IFT20；多克隆抗体中图分类号：Q81文章编号：1673-1689(2023)11-0106-07樊振川*2,3DOl:10.12441/spyswjs.20210627001ProkaryoticExpression,Purification,andPolyclonalAntibodyIdentificationofChlamydomonasreinhardtiIFT20JIARuiqin',JIAHang",ZHENGXuechao²,XUEBin23,FANZhenchuan'2.3(1.StateKeyLaboratoryofFoodNutritionandSafety,TianjinUniversityofScience&Technology,Tianjin300457,China;2.CollegeofBiotechnology,TianjinUniversityofScience&Technology,Tianjin300457,China;3.ChinaInternationalScience&TechnologyCooperationBaseforHealthBiotechnology,TianjinUniversityofScience&Technology,Tianjin300457,China)Abstract:Intraflagellartransportprotein20(IFT20)ofChlamydomonasreinhardtiisacomponentoftheintraflagellartransportcomplexB(IFT-B).IFT20isknowntobeinvolvedinregulatingintracellulartransportprocessesofmacromolecules,butitsdetailedfunctionasaflagellarproteininflagellaremainstobeinvestigated.ThisstudyaimedtodevelophighlyspecificpolyclonalantibodiesagainstChlamydomonasreinhardtiIFT20fromrabbitserumtolaythefounda...
