21曾冰梅：聚合酶链反应（PCR）分析仪测量结果的不确定度评定I计量检定聚合酶链反应(PCR)分析仪测量结果的不确定度评定曾冰梅（海南科瑞计量技术服务有限公司，海南海口570206）【摘要】以聚合酶链反应(PCR)分析仪测量结果为研究对象，论述了聚合酶链反应(PCR)分析仪测量结果不确定度的评定方法与过程。【关键词】聚合酶链反应；测量结果；不确定度[DOI编码】10.3969/j.issn.1674-4977.2023.06.007EvaluationofUncertaintyinMeasurementResultsofPolymeraseChainReaction1(PCR)AnalyzerZENGBingmei(HainanKeruiMeasurementTechnologyServiceCo.,Ltd.,Haikou570206,China)Abstract:TakingthemeasurementresultsofpolymeraseChainreaction(PCR)analyzerastheresearchobject,thispaperdiscussestheevaluationmethodandprocessofuncertaintyofmeasurementresultsofpolymeraseChainreaction(PCR)analyzer.Keywords:polymerasechainreaction;measurementresults;uncertainty1概述聚合酶链式反应又称为PCR，是分子生物学技术之一。PCR已成为分子生物学研究必不可少的一部分。PCR技术不仅可用于基础研究，还适用于日常的临床诊断、法医学调查和农业生物技术研究。PCR仪是一种能够为PCR反应自动完成温度循环和孵育的仪器，能够在短时间内将单个DNA分子扩增数百万倍。其扩增过程包括3个连续步骤：1)变性,对双链DNA模板进行加热，使其解离；2)退火，被称为引物的短DNA分子与目标DNA的侧翼区域结合；3)延伸,DNA聚合酶沿着模板链将引物3'端进行延伸。将这些步骤重复（循环)25~35次，即可按指数方式获得精确的目标DNA拷贝。1.1校准依据JJF1527—2015《聚合酶链反应分析仪校准规范》1.2标准器PCR仪温度验证系统，EGFR基因突变标准物质1.3被测对象荧光定量PCR仪。1.4测量方法1.4.1温度示值误差、温度均匀性校准将PCR仪（96孔）及温度校准装置各部件连接完好，在温度传感器表面上涂抹适量的导热油，将温度传感器置于PCR仪（96孔）的加热模块设定孔中。设定温度控制程序见表1。启动温度校准装置，记录整个数据采集过程并保存。表1PCR仪温度控制程序标准程序表步骤设定温度点设定温度持续时间130℃1min295℃3min330℃2min490℃3min550℃3min670℃3min760℃3min830℃1min1.4.2升降温速率校准设定PCR仪的温度控制程序，见表2。启动温度校准装22BRAND&STANDARDIZATION品牌与标准化2023年第6期置，记录整个数据采集过程并保存表21PCR仪温度控制程序标准程序步骤设定温度点...
