02-06ChineseVeterinaryScience网络首发时间：2023-05-302023,53(09):1102-1107中国兽医科学D0I:10.16656/j.issn.1673-4696.2023.0148中图分类号：S852.65文献标志码：A文章编号：1673-4696(2023)09-11鉴别感染羊驼4种病毒多重PCR检测方法的建立于远光1，岳涛²,马晓宁²,张永兴1*,王萌²,曾巧英²,刘艳红1，高闪电1,独军政",吴锦艳1,李坤1,许小红3（1.中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室，甘肃兰州730046;2.甘肃农业大学，甘肃兰州730070;3.甘肃省疾病预防控制中心，甘肃兰州730000)摘要：为了建立一种用于羊驼易感的羊口疮病毒（ORFV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV-1)、口蹄疫病毒(FMDV)、蓝舌病病毒(BTV)鉴别的多重PCR检测方法，根据GenBank中公布的ORFV、BVDV-1、FMDV和BTV参考株基因序列分别设计特异性引物，优化引物、dNTP、TaqDNA聚合酶浓度及退火温度，通过敏感性和重复性检验，并对60份羊驼粪便样品和35份羊驼咽拭子样品进行验证。结果显示，所建立的多重PCR方法能够有效区分ORFV、BVDV-1、FMDV和BTV，最低检测限分别为3.18X104copies/μL、3.13X101copies/μL、3.06X101copies/μL、2.95×102copies/μL。结论：所建立的多重PCR方法能够同时快速鉴别羊驼感染的ORFV、BVDV-1、FMDV和BTV，具有较高的应用价值。关键字：羊驼；口蹄疫病毒；羊口疮病毒；蓝舌病病毒；牛病毒性腹泻病毒；多重PCRDevelopmentofamultiplexPCRassayforidentificationof4virusesinalpacaYUYuan-guang',YUETao²,MAXiao-ning",ZHANGYong-xing*,WANGMeng”,ZENGQiao-ying”,LIUYan-hong',GAOShan-dian',DUJun-zheng',WUJin-yan',LIKun',XUXiao-hong?(1.StateKeyLaboratoryforAnimalDiseaseControlandPrevention/LanzhouVeterinaryResearchInstitute,ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Lanzhou730046,China;2.GansuAgriculturalUniversity,Lanzhou730070,China;3.GansuProvincialCenterforDiseaseControlandPrevention,Lanzhou730000,China)Abstract:Toestablishamultiplexpolymerasechainreaction(multi-PCR)assayforidentificationofsheepmouthsorevirus(ORFV),bovineviraldiarrheavirus(BVDV-1),foot-and-mouthdiseasevirus(FMDV),bluetonguevirus(BTV)inalpaca,4specificprimersweredesignedaccordingtosequencesofthefourpathogensfromGenBank,respectively,andthemulti-PCRassaywasoptimizedfortheconcentrationofprimers,dNTPandTaqDNApol...
