基础研究745ChinJContempNeurolNeurosurg,August2023,Vol.23,No.8中国现代神经疾病杂志2023年8月第23卷第8期胶质母细胞瘤FGFR3-TACC3融合基因介导丙酮酸激酶M2人核促进DNA损伤修复基础研究任修德李涛范吉康王希森贾晓丹杨学军【摘要】目的探讨胶质母细胞瘤FCFR3-TACC3（F3-T3融合基因介导丙酮酸激酶M2(PKM2）人核激活DNA损伤修复致替莫唑胺（TMZ)耐药的作用机制。方法慢病毒转染构建稳定表达F3-T3融合基因和空载体的胶质母细胞瘤细胞系U87MG和U251MG,构建稳定表达F3-T3融合基因的胶质母细胞瘤裸鼠模型，小动物活体成像系统观察荷瘤鼠肿瘤荧光信号强度；采用生物信息学分析基因芯片转录组数据分析F3-T3融合基因的生物学功能,并分析肿瘤基因组学图谱计划(TCGA)数据库中胶质瘤患者生存期与PKM2基因表达的关系；瞬时转染小干扰RNA（siRNA）敲低PKM2基因表达；CCK-8细胞增殖实验观察经梯度浓度替莫唑胺处理后、转染siRNA后、替莫唑胺联合PKM2抑制剂Compound3k处理后U87MG和U251MG细胞增殖活性；提取核质蛋白并观察经替莫唑胺处理后总蛋白提取物、胞质提取物和胞核提取物PKM2蛋白表达情况；Westernblotting法检测稳定表达F3-T3融合基因的U87MC和U251MG细胞PKM2蛋白相对表达量、磷酸化组蛋白H2AX（p-H2AX）相对表达量、siRNA敲低PKM2基因p-H2AX相对表达量。结果（1)CCK-8细胞增殖实验显示，经替莫唑胺640、320、160、80、40μmol/L处理后F3-T3转染组的U87MG细胞存活率均高于空载体转染组（P=0.000,0.000,0.000,0.004,0.010），经替莫唑胺640、320、160、80、40、20、5μmol/L处理后F3-T3转染组的U251MG细胞存活率亦均高于空载体转染组（P=0.000,0.000,0.000,0.0000.002,0.001,0.002）；然而，经替莫唑胺640、320、160、80、40、20、10、5和2.50μmol/L处理后si-PKM2-1009转染组的U87MC细胞存活率均低于F3-T3转染组（P=0.000，0.000,0.000,0.012,0.006,0.030,0.000,0.0070.025），经替莫唑胺640、320、160、80、40、20、5μmol/L处理后si-PKM2-1377转染组U251MG细胞存活率亦低于F3-T3转染组（P=0.000,0.000,0.002,0.000,0.002，0.0480.042）；经替莫唑胺640、320、160、80、40、20μmol/L处理后TMZ+Compound3k组U87MG细胞存活率低于TMZ组（P=0.000,0.000,0.000,0.000,0.001,0.002），经高浓度（640、320、160、80、40μmol/L）替莫唑胺处理后TMZ+Compound3k组U251MG细胞存活率亦低于TMZ组（P=0.000,0.000,0.000,0.000，0.003），而经低浓度（10、5、2.50μm...
