DOI:10.1网络首发时间：2023-06-052023,53(09):1089-1094中国兽医科学2023,53(09)ChineseVeterinaryScience6656/jissn.1673-4696.2023.0152中图分类号：S852.659.1文献标志码：A文章编号：1673-4696(2023)09-1089-06鉴别非洲猪瘟病毒基因缺失株与野生株多重qPCR方法的建立卓玛1,2,钱炳旭1,薛峰1,2*,戴建君1,吴晓东3*（1.南京农业大学动物医学院，江苏南京210000;2.南京农业大学三亚研究所，海南三亚572000;3.中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛266000)摘要：为开发一种快速、灵敏的非洲猪瘟病毒（ASFV)野生型株与基因缺失型株的鉴别诊断方法，本研究通过对ASFVp72、CD2v、MGF110-9L基因保守序列设计特异性引物和探针，并对体系进行优化，建立了一种可以同时检测p72、CD2v、MGF110-9L基因的多重qPCR方法。该方法与其他常见猪病毒性病原均无交叉反应，特异性强；敏感性试验结果显示，该方法对p72、CD2v和MGF110-9L重组质粒标准品的最低检出限均为102copies/mL，敏感性好；组内变异系数为0.03%~0.5%，组间变异系数为0.04%~1.5%，表明该方法重复性好。利用本方法和普通qPCR方法分别对50份临床样品进行检测，结果显示，两种检测方法对ASFV核酸的检出率均为70%（35/50），符合率为100%。综上所述，本研究建立的多重qPCR方法为临床鉴别检测ASFV野毒株与基因缺失株提供了重要材料。关键词：非洲猪瘟病毒；基因缺失型株；p72;MGF110-9L;CD2vEstablishmentofmultiplexqPCRmethodforidentificationofgenedeletionstrainsandwildstrainsofAfricanswinefevervirusZhuoma'-2,QIANBing-xu',XUEFeng.2*,DAIJian-jun',WUXiao-dong**(1.CollegeofVeterinaryMedicine,NanjingAgriculturalUniversity,Nanjing210000,China;2.SanyaInstituteofNanjingAgriculturalUniversity,Sanya572000,China;3.ChinaAnimalHealthandEpidemiologyCenter,Qingdao266000,China)Abstract:Todevelopaconvenient,rapidandsensitiveidentificationtechnologybetweenASFVgenedeletionstrainsandwild-typevirusstrains,threepairsofspecificprimersandprobesweredesignedforASFVp72(B646L)gene,CD2v(Ep402R)gene,andMGF110-9Lgene.Byoptimizingeachsystem,amultiplexqPCRsystemforsimultaneousidentificationofp72,CD2v,andMGF110-9Lgeneswasconstructed.Thismethodhasnocross-re-activitywithotherswinepathogens,Strongspecificity;Highreproducibility,thesensitivityofthethreetargetgen...
