拓展一专题二十七基因工程和生物技术的安全性与伦理问题新冠病毒的核酸检测１．取样（１）常用方法：咽拭子、鼻拭子和肛拭子取样法。（２）拭子样本成分：细胞、病毒、细菌、分泌物等。（３）样本处理方法①密封样本加热灭活后加入微离心管中，并在加入裂解缓冲液后，在振荡器中振荡。②对ＲＮＡ进行提纯（以离心柱法为例）：将含目的ＲＮＡ的样本加入离心柱中，其中加入了含ＳｉＯ２基质的洗涤缓冲液，在离心机中进行离心，洗涤缓冲液会通过滤过膜除掉样本所有残留的杂质，ＳｉＯ２基质可以吸附ＲＮＡ，留在管中；最后加入洗脱液，重新放入离心机，将ＲＮＡ和ＳｉＯ２分离，从而获得不含蛋白质、抑制剂和其他污染物的纯化ＲＮＡ。２．核酸检测核心技术———ＰＣＲ样本中获得的ＲＮＡ含量少，不易检测，需对样本中的ＲＮＡ进行扩增，利用的是ＰＣＲ技术。（１）ＰＣＲ检测试剂盒：包含了ＰＣＲ反应中需要的逆转录酶、耐高温的ＤＮＡ聚合酶、引物（２种）、ＴａｑＭａｎ探针等核心材料。（２）ＴａｑＭａｎ探针的结构及特点-"J+8 5BR.BOIJ"J+8 短波长荧光基团、３′－ＴａｑＭａｎ探针具有三要素：５′－端连着一个①端连着一个长波长荧光基团、可与靶ＤＮＡ中间部位结合的单链ＤＮＡ序列。②探针中的两个荧光基团由于距离过近，在荧光共振能量转移作用下发生了荧光淬灭，因此检测不到荧光。当探针ＤＮＡ的碱基被耐高温的ＤＮＡ聚合酶的核酸酶逐个切掉，会使两个荧光基团释放出来，解除了荧光淬灭的束缚。短波长的荧光基团在激发光的作用下，产生绿色荧光。（３）核酸检测过程*3/"JD%/"JD%/"D1$35BH.BOIF+8 5P#+%/"5F'①新冠病毒ＲＮＡ反转录：ＲＮＡ在试剂盒中逆转录酶的作用下逆转录出与其互补的单链ｃＤＮＡ，再通过耐高温的ＤＮＡ聚合酶组装成双链ｃＤＮＡ。②利用高温可以将连接两条ＤＮＡ单链的氢键短暂打断，使其以单链形式存在。③降低温度，试剂盒中的ＴａｑＭａｎ探针与目标ｃＤＮＡ单链互补配对，一段引物也会与该单链结合，耐高温的ＤＮＡ聚合酶从引物开始，沿着５′→３′的方向引导ＤＮＡ的复制，当该酶经过探针的位置时，其含有的５′外切酶可以将探针的碱基依次切除，包括荧光基团也会被释放，最终，此单链重组成了一条完整的ＤＮＡ双链。与此同时，另一条单链ｃＤＮＡ也被重新组装成一条完整...
