解螺旋陪伴医生科研成长http://www.helixlife.cn1MTT增殖实验1．实验原理MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide，是一种黄颜色的染料。活细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶能够代谢还原MTT，同时在细胞色素C的作用下，生成蓝色（或蓝紫色）不溶于水的甲臜（Formazan），甲臜的多少可以用酶标仪在570nm处进行测定。在通常情况下，甲臜生成量与活细胞数成正比，因此可根据光密度OD值来推测出活细胞的数目。由于死细胞中不含琥珀酸脱氢酶，因此加入MTT不会有反应。解螺旋http://www.helixlife.cn/2．实验目的通过该实验检测细胞生长状况。3.实验材料3.1.主要试剂试剂名称来源Cat.No.血清BI04-001-1A双抗HycloneSV30010胰蛋白酶HycloneSH30042DMSOSigmaD2650MTTSigmaM2128异丙醇国药集团化学试剂有限公司801092183.2主要仪器仪器名称来源型号生物安全柜苏净安泰BSC-B000IIA2二氧化碳培养箱Thermo311离心机上海卢湘仪公司TP25-ws解螺旋陪伴医生科研成长http://www.helixlife.cn2显微镜OlympusCKX41酶标仪Epoch波长595nm3.3试剂配制3.3.1完全培养基配制于基础培养基中，加入10%FBS,1%双抗，以及其他培养成分（个别细胞需要额外的营养因子，请查看细胞库列表），轻轻混匀，4℃冰箱储存（以下简称培养基）。3.3.2D-Hanks配制成分终浓度NaCl8g/LKCl0.4g/LNa2HPO4·7H2O0.1g/LKH2PO40.06g/LNaHCO30.35g/LGlucose1g/LPhenolred1ml调pH至7.4。3.3.30.25%胰蛋白酶配制0.22µm滤头过滤除菌，分装100mL一瓶，冻存于-20°C备用。3.3.4酸化异丙醇配制10%SDS，5%异丙醇，0.01M盐酸，加水溶解后室温储存。解螺旋http://www.helixlife.cn/0.25%Trypsin-0.02%EDTA0.25%Trypsin1:250Trypsinpowder0.25g1:250Trypsinpowder0.25gEDTA0.02gD-Hankssolution80mLD-Hank’ssolution80mLAdjustpHto7.4(NaHCO3)AdjustpHto7.4(NaHCO3)D-Hank’ssolution定容100mLD-Hankssolution定容100mL解螺旋陪伴医生科研成长http://www.helixlife.cn33.3.5MTT母液配制称取250mgMTT粉末，溶于50mlPBS中，待充分溶解后，过滤、分装，-20℃冻存备用。4.实验步骤解螺旋http://www.helixlife.cn/1)取5块96孔板，分别标记好d1~d5，划分上下左右为四个区域，分别标记好四种病毒名称，每个区域分三组细胞：CON、NC、KD，每组细胞5个副孔。准备好血球计数板；2)将处于对数期细胞消化后，4.51500rpm离心3min，去掉上清，沉淀用培养基重悬，制成细胞悬液；3)吸取10uL细胞悬液，...
