第12个:ELISA实验技术老曹聊科研ELISA品牌选择•2.13.ELISAConcentrationsofproinflammatorycytokines(IL-1β,IL-10,andTGF-β1)inbraintissueweremeasuredbyELISA(R&DSystem,Minneapolis,MN)accordingtothemanufacturer’sinstructions.https://doi.org/10.1016/j.phrs.2023.106912实验原理•ELISA是一种利用酶标抗原（Antigen，Ag）或抗体（Antibody，Ab），在固相载体上定量或定性测定特异性抗体、可溶性抗原及细胞表面抗原的固相酶免疫测定技术。简单讲，其原理就是抗原抗体反应。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。•夹心ELISA实验需要用到配对抗体（捕获抗体和检测抗体），其实验原理是将捕获抗体结合到ELISA板上，通过捕获抗体固定抗原，随后通过直接ELISA或间接ELISA的方式进行检测。在夹心ELISA实验中，最重要的是对配对抗体进行验证，确保配对抗体能同时与抗原结合，以确保实验的顺利进行。夹心ELISA实验先将捕获抗体固定于ELISA板孔中，然后加入分析物或样品，接着加入检测抗体。如果检测抗体是酶标抗体，则可称为直接夹心ELISA；如果检测抗体不带有标记，则还需要使用酶标二抗与检测抗体结合，这种称为间接夹心ELISA。夹心ELISA的灵敏度高，它比直接或间接ELISA敏感2-5倍；同时夹心ELISA使用两种特异性抗体与抗原结合，拥有很高的特异性。另外夹心ELISA能够通过直接或间接的方式进行检测，有着不错的灵活性。夹心ELISA的缺点是对配对抗体要求很高，如果没有标准化的试剂盒或者已经通过测试的配对抗体，则需要进行配对抗体定制并进行优化，因为降低捕获抗体与检测抗体之间的交叉反应是非常重要的。夹心ELISA尤其适用于复杂样品的分析，因为抗原不经纯化仍具能有高灵敏度和特异性（例如测量免疫应答中的细胞因子水平）。实验步骤•这里以炎症因子IL-1β为例试剂盒：MouseIL-1be...
