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第4篇-第4章-常用分子生物学技术的原理及其应用.pdfVIP免费

第4篇-第4章-常用分子生物学技术的原理及其应用.pdf_第1页
生物大分子相互作用研究技术蛋白质相互作用研究技术【2013131B】【2017122B】标签蛋白沉淀酵母双杂交技术DNA-蛋白质相互作用分析技术【2017123B】【2018147X】【2023028A】电泳迀移率变动分析染色质免疫沉淀技术蛋白质的分离、纯化与结构分析蛋白质沉淀用于蛋白质浓缩及分离有机溶剂沉淀蛋白质丙酮、乙醇等有机溶剂可以使蛋白质沉淀盐析分离蛋白质【2011025A】盐析是将硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等加入蛋白质溶液,使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏,导致蛋白质在水溶液中的稳定性因素去除而沉淀各种蛋白质盐析时所需的盐浓度及pH均不同,可据此将不同的蛋白质予以分离血清中的清蛋白和球蛋白,前者可溶于pH7.0左右的半饱和硫酸铵溶液中,而后者在此溶液中则发生沉淀。当硫酸铵溶液达到饱和时,清蛋白也随之析出盐析法可将蛋白质初步分离,但欲得纯品,尚需用其他方法免疫沉淀分离蛋白质利用抗原-抗体反应原理可用于特定蛋白质定性和定量分析透析和超滤法去除蛋白质溶液中的小分子化合物利用透析袋将大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法称为透析将蛋白质溶液装在透析袋内,置于水中,小分子物质可透过薄膜进入水溶液,由此可对盐析浓缩后的蛋白质溶液进行除盐应用正压或离心力使蛋白质溶液透过有一定截留分子量的超滤膜,达到浓缩蛋白质溶液的目的,称为超滤法电泳分离蛋白质通过蛋白质在电场中泳动而达到分离各种蛋白质的技术称为电泳纤维薄膜电泳将蛋白质溶液点样于薄膜上,薄膜两端分别加正、负电极带正电荷的蛋白质向负极泳动带负电荷的蛋白质向正极泳动带电多,分子量小的蛋白质泳动速率快带电少,分子量大的则泳动慢凝胶电泳凝胶置于玻璃板上或玻璃管中,凝胶两端分别加上正、负电极,蛋白质混合液即在凝胶中泳动电泳结束后,用蛋白质显色剂显色,即可看到多条已被分离的蛋白质色带层析分离蛋白质待分离蛋白质溶液(流动相)经过一个固态物质(固定相)时,根据溶液中待分离的蛋白质颗粒大小、电荷多少及亲和力等,使待分离的蛋白质组分在两相中反复分配,并以不同速度流经固定相而达到分离蛋白质的目的阴离子交换层析将阴离子交换树脂颗粒填充在层析管内,由于阴离子交换树脂颗粒上带正电荷,能吸引溶液中的阴离子再用含阴离子的溶液洗柱,含负电量小的蛋白质首先被洗脱下来增加Cl-浓度,含负电量多的蛋白质也被洗脱下来,于是两种蛋白质被分开装柱、吸附、洗脱凝胶过滤/分子筛层析层析柱内填满带有小孔的颗粒,蛋白质溶液加于柱之顶部,...

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