RNAextraction-Trizol一、主要流程1.准备耗材2.取出样品，在液氮中研磨成粉末，迅速转入2ml离心管适量Trizol中（1ml），剧烈混匀，室温静置20min，加入Trizol体积1/5的氯仿（200ul），剧烈混匀（1min）成乳浊液，静置分层（冰浴），12000g，4℃离心15min。3.上清约600ul，200ul×3，转入新的离心管中（2ml），，加入1/2-1/3（300-400ul）体积的水饱和酚（4℃会分层取下层液体），颠倒混匀成白色乳浊液，（冰浴）静置分层（5min），12000g，4℃离心15min。4.重复3，吸取上清，递减15ul。5.上清转移至1.5ml离心管，加入1/2体积氯仿剧烈混匀，冰浴分层。12000g，4℃离心15min。6.上清转移至1.5ml离心管中加入等体积的异丙醇（-20℃预冷），颠倒混匀(彻底混匀)，放置-20℃静置1h以上。7.去除，12000g，4℃离心25min。在超净工作台倒掉异丙醇，加入80%乙醇1ml（提前冰浴，由depc水配置），小心盖上盖子横滚几圈倒掉乙醇并用枪头吸取多余液体。8.再洗涤一次，加入80%乙醇，离心4-5min，倒掉乙醇。9.超净工作台吹干5min（一定要干）。10.加入适量（20ulDEPC处理过的超纯水），用枪头搅拌捣碎沉淀，方65度烘箱中5min，期间轻弹管子一次。11.稍离心。取上清到新的试管中，并分装少许检测，其余放-80℃。12.检测：OD值260/280=1.9-2.1或电泳1.关于Trizol的购买：目前市面上买的大多是100ml装的，比较出名的是Invitrogen公司的Trizol，100ml原装的据说要1200大洋以上，不过有一种据说香港分装的，只需600元，但是相对国产品牌三四百元的价格还是贵了一些。国产很多公司都有类似的Trizol试剂，价格大多三百多元，成分都差不多，可以说都是invitrogen的山寨产品。比如我用的是北京一家公司的，四百多，做出来也还不错。Takara有一款专门提取smallRNA的trizol，好像贵一些。2.关于配套试剂：Trizol法提取RNA是要用到氯仿、异丙醇和乙醇的。氯仿现在是违禁品，不大好买（我们学校试剂科现在不卖），所以买的时候要让试剂上给送，一般他们都能免费给送。氯仿遇光易分解，试剂商给你的时候应该是遮光的。异丙醇虽然没有特殊说明，但我查的据说也是最好避光保存，不过这种试剂都是棕色瓶子，能遮蔽大部分的光线了。3.关于实验时的防护：RNA很容易降解，所以实验时一般都要求口罩帽子的，避免组织的污染。不过以我的经验，好像内源性的RNA酶才是最主要的，也就是组织内本身的RNA酶。开始我是很小心，口罩手套帽子的，但是提取出来发现还是降解了，后来有经验了，即使组...
