RNA提取CTAB法提取RNA实验准备溶液配制（所需母液）注：1、6M与10MLicl区别，沉降步骤最终浓度都为2M/L，故6MLicl在沉降步骤加入上清体积的1/2，同理，10MLicl加入上清体积的1/4。2、1MTris-Hcl与DEPC反应，故不能用DEPC处理。3、EDTA与Tris-Hcl溶液配制时，要调节PH到8.0。4、0.1%DEPC处理的灭菌水配制1MTris-Hcl。溶液配制（RNA提取缓冲液配制）注：1、CTAB、PVP40、Nacl称量后混匀，再加入EDTA与Spermidine，最后加0.1%的DEPC处理过夜，121℃，15min灭菌处理。灭菌后，再加入Tris-Hcl。2、提取缓冲液在使用前加入2%的巯基乙醇，最好将配好的提取液分装使用。3、RNA提取液在使用前要在65℃水浴30min。溶液配制（SSTE溶液配制）注：1、溶液配制完成后，121℃，15min灭菌处理。灭菌后，再加入Tris-Hcl。2、SSTE溶液使用前要进行适当加温。样品研磨（注意事项）研钵、药匙放入烘箱中200℃，烘烤6-8h；或者将无水乙醇放入研钵中点燃灼烧。研磨样品之前，需要将研钵、药匙、1.5ml离心管放到液氮里预冷。要等液氮完全蒸发后刮取样品，放入预冷的离心管中，扔入液氮中备用。1、2、3、实验步骤前期准备1、准备冰盒2、打开65℃水浴锅3、预冷离心机实验步骤1、向研磨好的样品中，加入600ul的65℃预热的CTAB提取液。并迅速涡旋震荡30-60s，使粉末彻底溶解到CTAB中。2、将样品65℃水浴10-15min，期间记得颠倒混匀几次。3、加入等体积的氯仿/异戊醇，剧烈颠倒混匀，10000rpm，4℃，10min。4、吸上清，重复步骤3一次，将上清转移到新管中。5、加入1/2体积的6MLicl，混匀，4℃沉降过夜（6h>沉降时间<16h）。6、4℃，12000rpm，20min，弃上清（可倒掉大部分上清，然后用黄枪头吸干）。7、然后向沉淀中加入预热的SSTE溶液（常温或者4℃情况下，溶液会有沉淀），颠倒混匀，直至沉淀完全溶解。实验步骤8、加入等体积的酚：氯仿：异戊醇（25:24:1，最好是先加入酚，充分颠倒混匀以后，再加入氯仿，利于多糖的抽提）抽提两次，每次抽提完用4℃，12000rpm，10min。9、吸取上清，加入2倍体积的无水乙醇（-20℃预冷），然后放入-80℃沉降30min（可以将RNA保存到此步骤）。4℃，12000rpm，20min，弃上清。10、70%乙醇（-20℃预冷）清洗一次，4℃，10000rpm，15min，弃上清（最好用移液器轻轻吸去上清）。打开盖子，室温放置5min，加入30-100ul灭菌的DEPC处理过的水。11、跑胶验证，用1xTAE煮胶（水：TAE=49:1），制成1%的胶。吸取提好的RNA2ul，灭菌的DEPC处理的水4ul，Loa...
