~第1页~一、基因工程一、基因工程的原理（一）基因的结构1．原核基因的结构一个完整的原核基因包括__________________和__________________编码区：转录出____________的区域非编码区：对基因表达有_________作用启动子____________________________________终止子____________________________________2．真核基因的结构一个完整的真核基因包括编码区和非编码区非编码区：______________________________________________编码区包括：_____________________和_____________________基因表达时，____________________转录出mRNA，经过_______________过程，只有_______________翻译成蛋白质。（二）基因工程的技术条件1．核酸限制性内切酶识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并在特定部位切割，断开_______________键切割后的DNA片段末端有两种形式：__________________和__________________~第2页~2．DNA连接酶形成新的____________键，完成DNA的重组。来源于大肠杆菌，只能连接黏性末端；来源源于T4噬菌体，能连接黏性末端和平末端，连接____________效率较高。3．运载体（1）在宿主细胞内复制并稳定保存（2）具有一个或多个限制酶的切割位点（3）具有特殊的遗传标记基因（如抗青霉素基因）（4）种类：质粒、λ噬菌体、植物病毒、动物病毒二、基因工程的操作（一）获得目的基因1．PCR扩增过程引物：与体内DNA复制的比较：相同点：不同点：2．化学合成法~第3页~3．构建基因文库基因组文库cDNA文库（1）过程（2）条件和特点文库大小包含的基因是否有非编码区（3）两种文库的比较是否有内含子（二）构建表达载体（三）重组DNA导入受体细胞1．导入微生物细胞原理：用CaCl2处理可以________________________2．导入植物细胞（1）土壤农杆菌转化法（2）基因枪法~第4页~（3）花粉管通道法3．导入动物细胞构建转基因动物，选择的受体细胞通常是______________，采取____________方法将重组DNA导入动物细胞。（四）目的基因的检测1．阳性克隆的检测——DNA水平（1）利用载体标记（2）利用基因探针（3）利用特殊基因2．基因表达的检测——mRNA、蛋白质和性状水平（1）分子杂交（2）抗原—抗体反应（3）直接观察特定性状三、基因工程的应用（一）遗传育种（二）疾病治疗~第5页~1．生产基因工程类药物2．基因诊断3．基因治疗（三）环境保护四、基因工程的安全性和前景（一）转基因生物的安全性（二）蛋白质工程习题1．细菌常常作为基因工程的受体细胞，下...
