第39卷第3期2010年浙江大学学报(医学版)JOURNALOFZHEJIANCUNⅣERSl7ITY(MEDICALSC玎￡NCES)Vol39No32010h姊：∥www．jm唧a18．zju．edu．cn／7medDoI：10．3785／j．issn．1008·9292．2010．03．0凹苦瓜核糖体失活蛋白MAP30的原核表达和生物活性研究张黎黎，丁倩，詹金彪(浙江大学医学院生物化学与遗传学系，浙江杭州310058)[摘要]目的：从苦瓜籽中克隆HIV．1整合酶抑制剂MAP30，构建其表达栽体，并在大肠杆菌中进行表达，用于MAP30在细胞内的转运机理研究。方法：从成熟苦瓜种子中提取基因组DNA，通过PCR的方法扩增出MAP30基因的全长，并将其克隆进入原核表达载体pET-30a，转化助丘．B也l(DE3)，IPTG诱导表达，Ni—NTA亲和纯化，梯度咪唑洗脱。Mr兀'法分析生物学活性。结果：测序发现插入的MAP30基因序列正确，SDS—PAGE鉴定表达产物分子量正确，且MAP30主要以可溶形式表达。MrI．I．法测定重组的MAP30具有生物学活性，且对肿瘤细胞的毒性远远大于对正常细胞的毒性。结论：本研究成功地构建了MAP30的表达系统，并实现了MAP30的可溶性表达，表达后的蛋白具有生物学活性，可用于抗体一毒素的肿瘤靶向药物的合成。[关键词】MAP30；苦瓜；植物蛋白质类；核糖体蛋白质类；遗传学技术；重组，遗传[中图分类号】R996[文献标志码]A【文章编号]1008-9292【20lo)03也64一08ExpressionOfrecombinantribosomeinactiVatingproteinMAP30inE．cD跖anditsbiologicalactiVityzHANGLi-li，DINGQi卸，zHANJin-biao(Dep口厅玎把m旷Bi砌em厶打y彻d＆，暑et泌，co如酽矿舭打圮，喇玩昭‰溉酊，肌，舻『10M310058，侃iM)[Abstmct]objectiVe：Toclone卸dproduceribosomeinactiVatingpmteinMAP30fmmtIle∞edsofMomordicach姗tiaL(bittermelon)，andtoevaluatethebiologicaJactivityoftherecombin肌tprotein．Me山ods：111eDNAsequenceencodingMAP30w鹊clonedfromthefreshseeds0f肘D啪商眈c施r口爪玩byPCR，t王letargetDNAf咖entsweresequencedafterT-Acloning．711leexpressionpl器midw船constructedbyinsertingtheMAP30h舯entint0vectorpE仍0a．MAP30w鹊expre艇棚inEcD拓byadditionofIPTGintofinalconcentmtionof1．0mmoL／L．Therecombin卸tMAP30w鹪identifiedbySDS．PAGE，andtllebiologicalacti、rit)rofMAP30proteinwasevaJuatedbyusingM7ITassayincancerceUs粕dnoHnalcellsfoUowingnuid-ph鹊eendocytosis．R鹤Illts：Thenucleotideand锄inoacidsequencesoftheclonedM...
