测序的发展与文献案例剖析目录3三代测序介绍2二代测序介绍1一代测序介绍4其他测序介绍目录2二代测序介绍1一代测序介绍3三代测序介绍4其他测序介绍测序发展DNA测序技术经历的发展阶段和主要平台1950196019701980199020002010Heliscope单分子测序仪（2008）PacificBioscienciesNanopore单分子测序仪（2008）化学降解和Sanger(1977)第一台自动测序仪(1986)毛细管电泳Sequencer(1996)荧光ddNTP第一台商用全自动测序仪(1987)3700(1998)遗传密码(1966)DNA重组技术(1972)DNA双螺旋(1953)中心法则（1958）PCR(1983)DNA是遗传物质(1952)2011IontorrentPMGhttps://mp.weixin.qq.com/s/GReWY8yq7O_xVnajknrHZQ2015SolidSystem(2007)Illumina(2006)454(2005)CompleteGenomics（2009）BGISeq（2015）PacificBiosciencesPacBioRSII（2013）三代测序仪二代测序仪一代测序仪01第一代测序一代测序技术，也被称为Sanger测序，其实是由一个叫Sanger的人发明的一种测序方式，是目前所有基因测序的国际金标准。（1）速度快，成本低，定位精准针对已知致病基因的突变位点设计引物，进行PCR扩增直接测序，准确高达99.999%。（2）精准测量在800bp左右，最长也就1000-1500bp。一次只能测一条单一的序列优点缺点Step1：DNA提取Step2：打断单拷贝扩增Step3：对每个克隆进行sanger测序01测序的步骤ddATPddCTPddGTPddTTP提取的DNA（约10-20kbp）打断后的DNA（约2000bp）TA克隆：人的基因组3G，1代测序法每个克隆精确可测1500bp，则需要200百万个克隆；若测10倍,则需要2000万个克隆。电泳和放射自显影确定待测分子的DNA序列。由于ddNTP的2’和3’都不含羟基，其在DNA的合成过程中不能形成磷酸二酯键，因此可以用来中断DNA合成反应。01应用一、STR亲子鉴定、法医鉴定通过测定DNA片段的长度和颜色，来确定遗传关系。二、SnaPshot测序技术荧光标记单碱基延伸的分型技术，也称小测序，主要针对中等通量的SNP突变分型项目检测。通常用于10~30个SNP突变位点分析。优势：分型准确，通量高，检测速度快，不受SNP位点多态性特性限制，不受样本个数限制缺点：一般以血液为主，大数据样本01发展三、实时荧光定量PCR利用荧光信号积累实时监测整个PCR过程，最后通过标准曲线（或者与内参对照）对未知模板进行定量分析。1、突变寻找：定量PCRTaqMan探针杂交。2、基因定量：相对荧光定量PCR，医学上用来检测细菌或病毒RNA的表达量。应用领域（1）临床疾病诊断：各型肝炎、艾滋病、禽流感、结核、...
