实验四微生物的紫外诱变一、目的要求掌握紫外线诱发微生物突变的基本原理。掌握选育高产突变型菌株的方法。二、基本原理紫外线是一种最常用的物理诱变因素。它的主要作用是使DNA双链之间或同一条链上两个相邻的胸腺嘧啶形成二聚体，阻碍双链的分开、复制和碱基的正常配对，从而引起突变。紫外线照射引起的DNA损伤，可由光复活酶的作用进行修复，使胸腺嘧啶二聚体解开恢复原状。为了避免光复活，用紫外线照射处理时以及处理后的操作应在红光下进行，并将照射处理后的微生物放在暗处培养。三、实验器材菌株枯草芽孢杆菌培养基淀粉培养基溶液或试剂碘液，无菌生理盐水，盛4.5ml无菌水试管仪器或其他用具1ml无菌吸管，玻璃涂布棒，血细胞计数板，显微镜，紫外灯（15W），磁力搅拌器，台式离心机，振荡混合器等。四、操作步骤制备菌悬液取枯草芽孢杆菌48h斜面培养物4-5支→用10ml无菌生理盐水洗下菌苔→倒入无菌大试管→振荡30s，打散菌块→3000r/min离心10min→弃上清液→用无菌生理盐水洗涤菌体2-3次→制成菌悬液→用显微镜直接计数法调整细胞浓度108个/ml。（老师完成）制作淀粉琼脂培养基平板紫外线处理打开紫外灯预热20min。各取3ml菌悬液，分别加入2套6cm无菌平皿中，并放入一根无菌磁力棒。将平皿置于磁力搅拌器上，打开皿盖，在距离30cm，15W的紫外灯下分别搅拌照射1min和3min。盖上皿盖，关闭紫外灯。稀释：把照射过的菌悬液用无菌水稀释成10-1-10-6；涂平板：取10-4、10-5、10-6稀释液和未经照射的稀释液（对照）各0.1ml涂平板，重复三个平板；培养：用黑布或纸包好，37℃培养24h。观察诱变效应选取cfu数在5-6个左右的处理后涂布的平板观察诱变效应。分别向平板内加碘液数滴，在菌落周围出现透明圈。分别测量透明圈直径与菌落直径并计算其比值（HC比值）。选取HC比值大的菌落转接到试管斜面上培养，可用于复筛。五、注意事项紫外线照射计时从开盖起，加盖止；先开磁力搅拌器，再开盖照射，使菌悬液中的细胞接受均等照射；从紫外线照射处理开始，直到涂布完平板的所有操作步骤都需在红光下进行。分别计算紫外线处理1min和3min后的存活率和致死率存活率（%）=致死率（%）=100cfuXcfu处理后每毫升数对照每毫升数100cfucfuXcfu对照每毫升数处理后每毫升数对照每毫升数稀释倍数菌落数处理时间/min10-410-510-6各皿菌落数平均值各皿菌落数平均值各皿菌落数平均值0min1min3mi...
