Westernblot中膜的选择及其特点PVDF市场上出售的一般有俩种：0.45μm孔径和0.2μm孔径，作用原理是疏水作用导致其强的蛋白质吸附性，一般来说均一的0.45μm孔径特别适合于>20kD的蛋白质转印，0.2μm孔径适合<20kD的蛋白质转印。0.2μm孔径的PVDF膜吸附量会比较大，从而会导致背景很高！解决办法：用封闭液的时候加倍，时间加倍！不行就三倍！可以降低背景！解释：封闭:1、原先我们用脱脂奶粉封闭的浓度是0.5%,为了减低背景,需要把封闭液的浓度加倍到1%,如果效果还是不好可以加倍到1.5%.2、时间也要加倍，比如说，原先一小时，现在用两个小时。为什么用0.2um的膜背景会很高,是因为蛋白的结合和膜的表面积有关,0.2um的膜显然要比0.45um的膜的内表面积大.所以我们在封闭的时候要加大封闭的量和时间,要尽量完全封闭.NC膜PVDF膜尼龙膜的特点解答：尼龙膜是较理想的核酸固相支持物，有多种类型;硝酸纤维素膜(NC膜)是目前应用最广的一种固相支持物，价格最便宜;PVDF膜介于二者之间。就结合能力而言：尼龙膜结合DNA和RNA能力可达480-600μg/cm2，可结合短至10bp的核酸片段;硝酸纤维素膜(NC膜)结合DNA和RNA能力可达80-100μg/cm2，对于200bp的核酸片段结合能力不强;PVDF膜结合DNA和RNA能力可达125-300μg/cm2。就温度适应性而言：尼龙膜经烘烤或紫外线照射后，核酸中的部分嘧啶碱基可与膜上的正电荷结合;硝酸纤维素膜(NC膜)依靠疏水性相互作用结合DNA，结合不牢固;PVDF膜结合牢固，耐高温，特别适合于蛋白印迹。就韧性而言：尼龙膜较强;硝酸纤维素膜较脆，易破碎;PVDF膜较强。就重复性而言：尼龙膜可反复用于分子杂交，杂交后，探针分子可经碱变性被洗脱下来;硝酸纤维素膜(NC膜)不能重复使用;PVDF膜可以重复使用。WesternBlot时该选择NC膜还是PVDF膜?硝酸纤维素膜：硝酸纤维素膜(NC膜)是蛋白印迹实验的标准固相支持物。在低离子转移缓冲液的环境下，大多数带负电荷的蛋白质会与硝酸纤维素膜发生疏水作用而高亲和力的结合在一起，虽然这其中的机制还不是十分清楚，但由于硝酸纤维素膜(NC膜)的这个特性，而且易于封闭非特异性结合，从而得到了广泛的应用。在非离子型的去污剂作用下，结合的蛋白还可以被洗脱下来。根据被转移的蛋白分子量大小，要选择不同孔径的硝酸纤维素膜(NC膜)。因为随着膜孔径的不断减小，膜对低分子量蛋白的结合就越牢固。但是膜孔径如果小于0.1mm，蛋白的转移就很难进行了。因此，我们通常用0.45μm和0.2μm两种规格的硝酸纤...
