1第四章生产菌种的扩大培养与保藏2生产菌种扩大培养与保藏3本章讲述的内容•第一节种子的制备过程•第二节种子质量的控制•第三节实例•第四节生产发酵罐的无菌接种•第五节菌种的保藏与复壮发酵工业生产水平的三个决定要素生产菌种的性能发酵和提取工艺条件生产设备获得优良的生产菌种是实现高水平微生物工程工业生产的第一环节。第一节种子的制备过程一、菌种概述(一)生产用菌种的要求1.能在廉价原料制成的培养基上迅速生长,且生成的目的产物产量高、易于回收;2.生长速度和产物生成速度较快,发酵周期较短;3.培养条件易于控制;4.抗噬菌体及杂菌污染的能力强;5.菌种不易变异退化;6.对放大设备的适应性强;7.菌种不是病原菌,不产生任何有害的生物活性物质和毒素。自然界的一些微生物是在一定条件下产毒的,将其作为生产菌种应当十分当心,尤其与食品工业有关的菌种,更应慎重。据有的国家规定,微生物中除啤酒酵母、脆壁酵母、黑曲霉、米曲霉和枯草杆菌作为食用无须作毒性试验外,其他微生物作为食用,均需通过两年以上的毒性试验。7(二)种子扩培•种子扩大培养:是指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处于休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后,在经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级放大培养而获得一定数量和质量的纯种过程。这些纯种培养物称为种子。种子扩培的目的提供大量而新鲜的、具有较高活力的菌种;目的是:a、缩短发酵周期,降低能耗,提高设备利用率b、为了使培养菌在数量上取得绝对的优势,抑制杂菌的生长。菌种的驯化:让菌种从固试管、液体试管……,逐步适应;菌种经过扩大培养,可以提高生产的成功率,减少“倒罐”现象(稳打稳扎,步步为营)。9作为种子的准则(注意菌种与种子区别)1.菌体总量及浓度能满足大容量发酵罐的要求;2.菌种细胞的生长活力强,移种至发酵罐后能迅速生长,迟缓期短;3.生理性状稳定;4.无杂菌污染;5.保持稳定的生产能力。10•种子制备的过程大致可分为:–实验室种子制备阶段–生产车间种子制备阶段11二、实验室种子的制备1、培养物选择的原则目的:种子扩培到一定的量和质,根据菌种的特点最终的培养物可分为两类:对于不产孢子和芽孢的微生物——获得一定数量和质量的菌体,如谷氨酸的种子培养。获得一定数量和质量的孢子对于产孢子的微生物(一)概述2、培养基选择的原则培养基的选择应该是有利于菌体的生长,对孢子培养基应该是有利于孢子的生长。在原料方面,实验室种子培养阶段,规模一般...