大-小鼠髓核细胞分离培养.docVIP免费

大/小鼠髓核细胞分离培养1.解剖分离大/小鼠髓核；（用含2×P/S的PBS浸泡，常温放置(室温低于26℃时采用)或4℃放置(室温高于26℃时采用)不超过2h；2.髓核用PBS洗涤两遍：向装有髓核的EP管加入1ml含2×P/S的PBS，1000rpm离心5min后小心移除PBS，此操作重复1次；3.消化：用DMEM/F-12基础培养基把Trypsin和EDTA储液稀释成含0.01%Trypsin和0.1mMEDTA的消化酶工作液，向上述洗涤后的髓核加入髓核体积5～10倍的消化酶工作液，尽量剪碎髓核后，EP管封口膜封口，37℃水浴锅中孵育15min，每隔5min弹匀一次，根据消化效果随时终止消化，消化时间原则上不超过15min；4.孵育结束后，加入1ml含10%FBS的完全培养基终止消化,混匀，1000g，室温，离心10min，小心移除上清；加入0.5ml完全培养基重悬细胞及组织，吹打12下，把细胞及组织悬液放种于24孔板。