解螺旋陪伴医生科研成长http://www.helixlife.cn1肿瘤原发耐药细胞株1.实验原理肿瘤耐药是临床肿瘤化疗中的常见现象，是困扰临床的重要难题和亟待解决的困境。肿瘤的耐药又分为先天性耐药（原发耐药）和获得性耐药（继发耐药）。先天性耐药（naturalresistance）/原发性耐药（Primaryresistance）：在使用抗肿瘤药物前，细胞就对药物不敏感的现象。例如，处于非增殖期G0期的肿瘤细胞，一般对于多数抗肿瘤药物都不敏感。如果细胞存在先天性耐药现象，在使用抗肿瘤药物前，先天性耐药现象就已经存在于肿瘤细胞当中，与药物的使用无关。获得性耐药（acquiredresistance）/继发性耐药（Secondaryresistance）：这种现象指的是，肿瘤细胞初始对化疗药物敏感，但经过数个疗程的进一步治疗之后，药物的疗效逐渐降低，产生不敏感的现象，从而导致肿瘤细胞内部产生对于药物的抗性。获得性耐药是由药物诱导产生的，即在药物使用前，肿瘤对药物敏感；而在药物应用后，肿瘤细胞产生的耐药现象。解螺旋http://www.helixlife.cn/耐药细胞株是研究肿瘤耐药的常用体外模型。2.实验目的筛选原发耐药细胞，建立原发耐药细胞株3.实验材料3.1.主要试剂化疗药、目标细胞（可以选择原发耐药的患者分离原代的细胞，也可选择已建系的细胞株）、培养基、胰酶等解螺旋陪伴医生科研成长http://www.helixlife.cn23.2.主要仪器超净台、二氧化碳培养箱、离心机、显微镜、酶标仪4.实验步骤4.1.IC50(halfmaximalinhibitoryconcentration，是指药物抑制50%细胞的浓度)的检测1.取对数生长期的细胞，接种于96孔板内，待细胞贴壁后，换上带有不同梯度浓度药物的培养基（如0.1，0.25，0.5，1，2，5，10μM。若是浓度不确定，可先查阅文献，获得一个大致的范围，在这个范围里设置梯度，第一轮，可以采取大倍数梯度稀释，如10倍，第二轮，小幅度梯度，如2倍倍比稀释或等差比例稀释。2.于不同的时间点检测细胞增殖情况。解螺旋http://www.helixlife.cn/3.计算细胞的IC50。4.2.筛选原发耐药细胞1.取对数生长期的细胞接种于6cm培养皿，待细胞生长到90%时，换成含有IC50浓度药物的培养基，培养24-48小时，观察细胞的存活情况，出现大量细胞凋亡时，换液，加入正常培养基继续培养。2.每1-2天换液以清除凋亡而漂浮的细胞，直至剩下的细胞不再发生明显凋亡，改为3-5天换液。3.待细胞重新长满至90%汇合度时，胰酶消化细胞，取部分细胞检测一下IC50，剩余部分继续扩增培养。4.重复1-3步，直到IC50满...
