免疫组织化学免疫组织化学又称免疫细胞化学，是通过共价键将酶连接在抗体上，制成酶标抗体，再利用酶对底物的特异催化作用，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，于普通显微镜或电镜下进行细胞表面及细胞内各种抗原成分的定位。目前通常选用免疫酶组化间接染色法进行实验，利用该技术，可进行细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质（如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等）。由于免疫组化具有特异性强、灵敏度高、定位准确等特点，且能将形态研究与功能研究有机地结合在一起，这门新技术已被广泛地应用于生物学和医学研究的许多领域。在病理学研究中，免疫组化技术的作用和意义更为重要。实验前准备在实验开始前，要先确保该实验所用到的试剂都准备到位，如：不同浓度梯度的乙醇，PBS缓冲液，3%过氧化氢，10%正常山羊血清，0.01M枸橼酸缓冲液，DAB显色液，二甲苯和抗体等。本实验所使用到的仪器和耗材有：芬兰百得提供的移液器，赛默飞的QSP盒装吸头、恒温箱，医用微波炉，盖玻片，镊子，洗瓶，湿盒，切片架等。本视频按照以下步骤展开实验：脱蜡复水后进行抗原修复，接着免疫反应，化学染色，最后脱水封片并进行结果分析。脱蜡复水首先对组织切片进行脱蜡复水处理：切片在室温放置60min后，浸泡在二甲苯中。10min后，放入另一个装有二甲苯的染缸再泡10min。脱蜡后，将组织切片逐级放入无水乙醇、95%、85%，75%，50%的乙醇中，每次处理均为5min。水合处理后，将组织切片放入纯水中，孵育5min，再转移放入PBS缓冲液中孵育5min。抗原修复抗原表位修复之前，需进行内源性过氧化物酶的淬灭处理：滴加3%过氧化氢溶液于切片上，湿盒孵育10min。用PBS浸泡清洗3次，每次5min，尽可能洗去残留的过氧化氢。将切片浸入0.01M枸橼酸缓冲液中，微波中大火力加热至沸腾并保持8min，取出容器，待缓冲液温度自然降到室温。反复2次，用PBS再洗5min。免疫反应用滤纸擦去周围多余的PBS，滴加PBS稀释好的10%正常山羊血清，室温湿盒封闭30-60min。孵育结束后，去除封闭液，滴加一抗工作液，4°C孵育过夜。第二天，移去一抗后，用PBS洗两次，每次10min.擦去切片周围多余的液体，滴加二抗工作液，室温孵育30min。弃去二抗后，PBS洗两次，每次10min。化学染色去除切片上多余的PBS,滴加新鲜配制的DAB工作液，湿盒孵育，在显微镜下监测染色程度。染色结束后，PBS浸泡洗去DAB染液，每次5min，重复3次。去除残留液体，苏木素复染2-5min，复染结束后，用水洗去多余...
