解螺旋陪伴医生科研成长http://www.helixlife.cn1裸鼠皮下成瘤1.实验原理肿瘤细胞具有极强的增殖能力，在一个适宜的环境中就能够实现细胞增殖分裂。裸鼠成瘤是最常见的验证肿瘤细胞体内增殖模型。由于大部分肿瘤研究使用到的是人类来源的细胞，种植到免疫正常的动物体内会发生免疫排斥反应，所以需要用免疫缺陷型小鼠作为成瘤模型的动物。2.实验目的裸鼠成瘤实验通过在裸鼠的皮下注射肿瘤细胞，通过观察瘤体生长变化来判断肿瘤细胞的生物学特性，从而评估肿瘤细胞在体内增殖能力的变化。3.实验材料3.1.主要试剂4-6周龄的SPF级BALB/c裸鼠若干（一般可以雌雄对半，特殊的需要偏向选择，比如研究宫颈癌要选取全雌性，研究前列腺癌要选取全雄性。通常为了避免裸鼠饲养过程中死亡而损失数据，在起始实验阶段，每组的只数会设置在8-10只），待接种的细胞，细胞培养基，0.25%胰蛋白酶-EDTA，胎牛血清，无菌预冷PBS，75%酒精。3.2.主要仪器培养皿，生物安全柜，二氧化碳培养箱，倒置相差显微镜，离心机，离心管，移液枪，超净台，注射器，电子天平.解螺旋http://www.helixlife.cn/4.实验步骤4.1制备细胞悬液预先将细胞接种到培养皿并于37℃、5%CO2的培养箱中培养，待对数生长期的细胞生长达到80-90%，弃去培养皿中的培养基，用无菌预冷PBS冲洗两遍，加入0.25%胰蛋白酶-EDTA1ml到培养皿中消化细胞，静置约2-5min，用倒置相差显微镜观察细胞消化状态，待镜下细胞出现晒网状空隙时加入2-3ml完全培养基终止消化，用移液枪轻轻吹打，使细胞悬浮，收集细胞悬液至离心管，并使用离心机1000r/min离心5min，弃去上清，用预冷无菌PBS洗两遍，再加入预冷无菌PBS，轻轻吹打细胞沉淀，混匀成细胞悬液，用细胞计数板计数细胞，解螺旋陪伴医生科研成长http://www.helixlife.cn2重悬细胞至密度为1×107个/ml（可根据接种细胞密度调整为其他浓度），最终将细胞悬液至于冰上暂存。4.2皮下接种在超净台上，选择血供丰富的区域（腋窝中后部或者腹股沟中上部），用75%酒精消毒需要注射的部位。接种前使用移液枪将细胞悬液充分吹散，用注射器吸取细胞悬液，于注射部位的皮下进行接种，接种体积为0.1ml（最多不要超过0.2ml），接种密度视细胞而异，一般在1×106-×107个/只。解螺旋http://www.helixlife.cn/4.3结果观察接种完成后，无菌环境下正常饲养接种的裸鼠，每隔3-4天用游标卡尺测量肿瘤的最长以及最短径线，计算并记录肿瘤的体积大小（如果有条件，可以同时称一下裸鼠体重）...
