解螺旋陪伴医生科研成长http://www.helixlife.cn1磁珠分选乳腺癌CD44＋/CD24-干细胞群1.实验原理MACS(MagneticActivatedCellSorting):＝免疫学＋细胞生物学＋磁力学基于抗体对抗原的特异性识别，用磁性微珠直接或者间接偶联在抗体上，从而与细胞相连，在高强度、梯度磁场中达到细胞磁性分离的目的。2.实验目的筛选出乳腺癌中CD44＋/CD24-干细胞群。解螺旋http://www.helixlife.cn/3.实验材料3.1.主要试剂（试剂来源仅供参考）试剂来源GoatAnti-MouseIgGMicroBeadsMiltenyiBiotecCD44MicroBeadshumanMiltenyiBiotecCD24MicroBeadKithumanMiltenyiBiotecPBE孵育液：0.5％BSA、0.08％EDTAPH7.2PBS3.2.主要仪器（仅供参考）分选架、离心机、MACSSeparationColumns磁性分离柱。4.实验步骤1.制备单细胞悬液，用PBE液体进行洗涤，滤膜过滤后，进行细胞计数。2.细胞悬液进行离心（700rpm×5min），上清完全弃去。3.采用PBE对细胞进行重悬（40ul/107个细胞）4.每107个细胞加入10ulCD24-Biotin解螺旋陪伴医生科研成长http://www.helixlife.cn25.细胞混匀后在冰箱（2-8℃）孵育15min。6.加入PBE（500ul/107个细胞）进行清洗，离心（700rpm×5min），弃上清。7.PBE重悬细胞（800ul/107个细胞）8.每107个细胞加入20ulAnti-Biotin磁珠（MicroBeads）9.细胞混匀后在冰箱（2-8℃）孵育15min10.加入PBE（500ul/107个细胞）进行清洗，离心（700rpm×5min），弃上清。11.PBE（500ul/107个细胞）重悬细胞，准备过柱分离。12.将分选柱插入分选架，500ulPBE预洗分选柱三次。13.将500ul的细胞悬液倒入分选柱中，收集滴下来的CD24-细胞。14.分选柱脱离磁场后，PBE冲洗分选柱，收集CD24+细胞。15.CD24-细胞用PBE清洗后，离心弃上清。解螺旋http://www.helixlife.cn/16.采用PBE对细胞进行重悬（80ul/107个细胞）17.每107个细胞加入20ulCD44-MicroBeads18.细胞混匀后在冰箱（2-8℃）孵育15min19.加入PBE（500ul/107个细胞）进行清洗，离心（700rpm×5min），弃上清。20.PBE（500ul/107个细胞）重悬细胞，准备过柱分离。21.将500ul的细胞悬液倒入分选柱中，收集滴下来的CD24-/CD44-细胞。22.分选柱脱离磁场后，PBE冲洗分选柱，收集CD24-/CD44+细胞，计数备用。5.参考1及应用实例文献2-41.KorkusuzP,KoseS,YersalN,OnenS.Magnetic-BasedCellIsolationTechniquefortheSelectionofStemCells.MethodsMolBiol2018.2.MajkaSM,MillerHL,HelmKM,etal.Analysisandisolationofadipocytesby...
