乳鼠心肌细胞及成纤维细胞的原代分离和培养备注：试剂用量为1只乳鼠所需用量D1：（次日开始培养的话，提前：17～21h）1.提前准备①镊子2把，剪刀1把，皿3个，血清瓶2个（一个含转子），离心管1个等高压灭菌，烘干--------.放饭盒内于烤箱内保存②提前30min照台（放入）：饭盒，1把1000μl枪，枪头，装有75%酒精的小烧杯，封口胶，纱布③同时把PBS从4度冰箱中放入37℃水浴箱。④通风10min.⑤准备一只一次性手套2.PBS(含2×P/S)加入培养皿，共2～3个；3.准备好镊子，剪刀，血清瓶；4.超净台面铺上纱布，乳鼠在75%中浸泡10s后，取出，从剑突左下用眼科剪刺入，打开胸腔，稍用力挤压使心脏凸出，用镊子把心脏夹出，放在加有PBS的培养皿中；5.将心脏的血液挤出洗净后移到另一个加有PBS的培养皿中，将心脏撕裂2～3下，裂而不断的程度即可；6.将心脏夹入血清瓶中，加入500μlTrypsin，4℃消化过夜。（Trypsin不要加温、在取心脏之前从4℃保存的冰箱里取出，Trypsin不要加热，以免影响效果）；D2：(12～16h后：早上9h开始）1.提前准备：移液枪3把（大，中，小），枪头，过滤器，注射器，培养瓶，封口膜，DMEM、血清、PBS37℃水浴预热；2.照台30min；通风10min。3.配制胶原消化液：CollagenasetypeⅡ1.25mg/BSA12.5mg/PBS2.5ml(0.22μm滤膜过滤除菌)；3.往消化过夜的心脏/Tripsin瓶中加DMEM(含10%FBS)500μl终止消化，37℃水浴5min；4.弃上清，加PBS清洗(这一步是为了将collagenase里的Trypsin/DMEM洗出)2次；5.弃上清、将心肌组织移入有磁力搅拌子血清瓶中(该时间点，如果有少量分解的心肌组织液进入上清液中的话，不要在意，随上清一起弃之)，加500μl胶原消化液，置于恒温震荡器上37℃消化15min，磁力搅拌子转速150rpm（杯里的搅拌棒会被伴随震荡，从而达到搅拌的效果）6.将上清移入离心管中，上清用PBS稀释，1000rpm离心5min，弃上清，细胞沉淀用1ml完全培养基重悬；7.重复上述5～6步骤1～2次，直至心肌组织消化完全；8.合并5～7步骤所得细胞悬液，吹打混匀后种100mm培养皿。5%CO2，37℃孵育70min(差速贴壁纯化心肌细胞，纤维细胞较心肌细胞贴壁速度快)；8.差速贴壁结束后，轻晃培养皿，将上清移到离心管中。（可进一步用5mlmedium冲洗培养皿、将其移离心管中）9.1000rpm离心5min；10.弃上清，加1mlDMEM完全培养基重悬所得细胞沉淀，0.4%台盼蓝染色，计算活细胞数。11.调整细胞至适宜浓度后根据需要接种至培养瓶或培养皿(板)中。
