农业生物技术学报JournalofAgriculturalBiotechnology2008，16(5)：891-897利用免疫共沉淀技术研究RSVCP、SP和NSvc4蛋白的互作术·研究论文·鹿连明，秦梅玲，王萍，兰汉红，牛晓庆，谢荔岩，吴祖建料，谢联辉料(福建农林大学植物病毒研究所，福建省植物病毒学重点实验室，福州350002)摘要：为了检测水稻条纹病毒(Ricestr~evirus，RSV)外壳蛋I~(coatprotein，CP)、病害特异蛋l~(disease—specialprotein，SP)和可能的运动蛋白NSvc4自身和两两之间的互作关系，首先通过PCR扩增获得了分别融合有HA或c．Myc标签的RSVCP、SP和NSvc4基因，并将其插入到植物表达载体pEGAD或pKYLX71：355"2中。重组质粒转化根癌农杆菌(Agrobacteriumtume．faciens)EHA105后，将含有不同重组质粒的根癌农杆菌菌液混合后注射烟草(Nicotianabenthamiana)n-~片。提取烟草中瞬时表达的蛋白，以HA或c—Myc抗体进行免疫共沉淀试验，最后免疫混合物通过c—Myc抗体或HA抗体进行Westernblot检测，确定蛋白的互作情况。结果表明，RSVCP蛋白自身能够发生互作，而CP与SP，CP与NSvc4，SP与sP，sP与NSvc4，及NSvc4与NSvc4蛋向之问均未有检测到互作现象。关键词：水稻条纹病毒；免疫共沉淀；蛋白互作中图分类号：SI88文献标识码：A文章编号：1006．1304(2008)05—0891．07StudiesontheInteractionsbetweenRSVCP．SPandNSvc4ProteinsUsingCo—immunoprecipitationTechnologyLULian—ruing，QMei-ling，WANGPing，LANHan—hong，NIUXiao—qing，X1ELi—yan，、VuZu-jian，XIELian—hui(InstituteofPlantVirology,KeyLaboratoryofPlantVirologyofFujianProvince,FujianAgricultureandForestryUniversity,Fuzhou350002．cbina)Al，BtraⅨ：InordertodetecttheinteractionbetweenRicesfrevirus(RSV)coatprotein(CP)，disease—specialprotein(SP)andNSvc4，theHA—taggedorc—Myc—taggedCP,SPandNSvc4ofRSVwereamplifiedbyPCR，andtheninsertedintoplantexpressionvectorpEGADorpKYLX71：35S2．TherecombinantplasmidsweretransformedintoAgrobacteriumtumefaciensEHA105，andtheEHA105containingdifferentrecombinantwasinjectedintoNicotianabenthamiana．ThetotalproteinswereisolatedfromAgrobacterium—infiltratedMbenthamianaleaves．andCO—immunoprecipitatedwithHAorc—Mycantibody．TheimmunocomplexesweredetectedbyWesternblotwithC-MycorHAantibodytoidentifytheinteractionbetwe...
