解螺旋陪伴医生科研成长http://www.helixlife.cn1划痕愈合实验1．实验原理当细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。基本的步骤包括“划痕”的制造，细胞迁移期间图像的获得以及后期数据的处理。2．实验目的检测贴壁生长肿瘤细胞的侵袭转移能力。解螺旋http://www.helixlife.cn/3．实验材料3.1.主要试剂试剂/材料名称来源Cat.No.血清BI04-001-1A双抗HycloneSV30010胰蛋白酶HycloneSH30042CultureInsertIbidiEubio80206（举例）3.2主要仪器仪器名称来源型号生物安全柜苏净安泰BSC-B000IIA2二氧化碳培养箱Thermo311离心机上海卢湘仪公司TP25-ws显微镜OlympusCKX413.3试剂配制3.3.1完全培养基配制于基础培养基中，加入10%FBS,1%双抗，以及其他培养成分（个别细胞需要额外的营养因子），轻轻混匀，4℃冰箱储存。解螺旋陪伴医生科研成长http://www.helixlife.cn23.3.2无血清培养基配制于基础培养基中，加入1%双抗，以及其他培养成分（个别细胞需要额外的营养因子），轻轻混匀，4℃冰箱储存。解螺旋http://www.helixlife.cn/3.3.3D-Hanks配制成分终浓度NaCl8g/LKCl0.4g/LNa2HPO4·7H2O0.1g/LKH2PO40.06g/LNaHCO30.35g/LGlucose1g/LPhenolred1ml调pH至7.4。3.3.40.25%胰蛋白酶配制0.22µm滤头过滤除菌，分装100mL一瓶，冻存于-20°C备用。4．实验步骤4.1传统实验方法实验步骤：1)培养板接种细胞之前先用marker笔在12孔板背面画横线标记（方便拍照时定位同一个视野）。2)消化细胞，终止消化后1500rpm离心3min,吸去上清，用PBS重选洗一遍，并细胞计数。3)细胞计数后接入12孔板，数量以贴壁后铺满板底为宜（数量少时可培养一段时间0.25%Trypsin-0.02%EDTA0.25%Trypsin1:250Trypsinpowder0.25g1:250Trypsinpowder0.25gEDTA0.02gD-Hankssolution80mLD-Hank’ssolution80mLAdjustpHto7.4(NaHCO3)AdjustpHto7.4(NaHCO3)D-Hank’ssolution定容100mLD-Hankssolution定容100mL解螺旋陪伴医生科研成长http://www.helixlife.cn3至铺满板底）。4)细胞铺满板底后，用200ul枪头垂直于孔板制造细胞划痕，尽量保证各个划痕宽度一致。（这种用枪头制造划痕难以保证划痕宽度的一致性，影响实验结果，这也是该方法最大的缺陷）5)吸去细胞培养液，用PBS冲洗孔板三次，洗去划痕产生的细胞碎片。6)加入无血清培养基，拍照记录。7)将培养板放入培养箱培养，每隔4-6小时取出拍照。8)根...
