解螺旋陪伴医生科研成长http://www.helixlife.cn1蛋白乙酰化检测1.实验原理（1）对于有蛋白特异的乙酰化抗体，可参照Westernblotting原理，提取蛋白，直接用Westernblotting技术检测目的蛋白的乙酰化修饰水平（2）对于没有蛋白特异的乙酰化抗体，可参考IP原理。我们通常同时做如下两方面实验：①用A蛋白的抗体把蛋白A沉淀下来,再用乙酰化泛抗体来检测乙酰化A的变化（本实验步骤采取此法）。②用乙酰化泛抗体把所有乙酰化蛋白免疫沉淀下来,再用蛋白A的抗体来检测乙酰化A的变化。解螺旋http://www.helixlife.cn/2.实验目的检查目的蛋白的乙酰化修饰水平。3.实验材料3.1.主要试剂RIPA裂解液（强）（上海碧云天生物技术有限公司）PMSF（上海碧云天生物技术有限公司）TSA（美国Sigma公司）NAM（美国Sigma公司）BCA蛋白浓度测定试剂盒（上海碧云天生物技术有限公司）Beads（美国GE公司）SDS-PAGE蛋白上样缓冲液（上海碧云天生物技术有限公司）SDS-PAGE凝胶制备试剂盒（上海碧云天生物技术有限公司）彩色预染蛋白质分子量标准（美国Thermo公司）PVDF膜（德国MerckMillipore公司）脱脂奶粉（美国BD公司）赖氨酸乙酰化泛抗体（杭州景杰生物科技有限公司）羊抗鼠辣根过氧化物酶标记的二抗（北京中杉金桥生物技术有限公司）标签抗体（瑞士Roche公司）免疫印迹发光液（美国Thermo公司）解螺旋陪伴医生科研成长http://www.helixlife.cn23.2.主要仪器迷你离心机（1H10K，湖南赫西仪器装备有限公司）恒温磁力搅拌器（HJ-3，上海龙跃仪器设备有限公司）电泳仪电源（EPS-200，上海天能科技有限公司）迷你垂直电泳仪（BG-verMINI，北京百晶生物技术有限公司）迷你垂直转印槽（BG-blotMINI，北京百晶生物技术有限公司）涡旋振荡器（G560EVORTEX-GENIE2，美国ScientificIndustries公司）干式恒温器（MK-10，杭州奥盛仪器有限公司）水平摇床（TS-100，海门市其林贝尔仪器制造有限公司）精密天平（JJ323BC，常熟双杰测试仪器厂）四度离心机（sorvallst8/8rcentrifuge，德国Thermo公司）酶标仪（iMark，美国Bio-Rad公司）化学发光仪（UniversalHoodII，美国Bio-Rad公司）3.3.其他（请具体写明）提取蛋白时，要在裂解液中加入去乙酰化酶抑制剂TSA和NAM。4.实验步骤I.制备全细胞提取液1、收集细胞，去除培养基后，用预冷的1xPBS洗涤细胞2次，最后一次吸干PBS，加入预冷的RIPABuffer(含5µMTSA和50mMNAM)收刮细胞，置于1.5mlEP管中。2、将含有细胞的1.5mlEP管置于冰上；超声破...
