解螺旋陪伴医生科研成长http://www.helixlife.cn1流式细胞仪分选细胞1.实验原理当经荧光染色或标记的单细胞悬液放入样品管中，被高压压入流动室内。流动室内充满鞘液，在鞘液的包裹和推动下，细胞被排成单列，以一定速度从流动室喷口喷出。在流动室的喷口上配有一个超高频的压电晶体，充电后振动，使喷出的液流断裂为均匀的液滴，待测细胞就分散在这些液滴之中。将这些液滴充以正、负不同的电荷，当液滴流经过带有几千伏的偏转板时，在高压电场的作用下偏转，落入各自的收集容器中，没有充电的液滴落入中间的废液容器，从而实现细胞的分离。解螺旋http://www.helixlife.cn/2.实验目的将特定的细胞从细胞群体中分选出来。3.实验材料3.1.主要试剂试剂来源Cat.No.人全血单个核细胞分离液天津灏洋生物制品科技有限责任公司LDS1075胎牛血清Invitrogen100991413.2.主要仪器仪器名称来源型号离心机ThermoMicro17R流式细胞分选仪BDFACSAriaII超净工作台北京半导体设备一厂4°C冰箱浙江华美电器制造有限公司CO2细胞培养箱美国ThermoFisher公司解螺旋陪伴医生科研成长http://www.helixlife.cn24.实验步骤4.1.样本制备:(1)获取细胞悬液→荧光抗体染色→调整细胞浓度(参考Table1)→避光置冰上运至分选室→移入带过滤头的流式管→等待分选。解螺旋http://www.helixlife.cn/(2)常用人外周血单个核细胞进行细胞分选，其步骤为：1)收集一管EDTA抗凝外周血，置于15mL离心管中，并加入等量PBS溶液稀释，用吸管充分吹打混匀;2)于另一个15mL离心管中加入等体积PBMC分离液3)将7mL稀释后的全血样品缓慢加入PBMC分离液上层，注意:倾斜45度缓慢加入，不可用力过大，避免将全血样品混入PBMC分离液中;4)置入离心机中，配平，1800rpm离心20min;5)离心后，缓慢取出离心管，于超净台内用吸管吸去大部分上清液(即血浆)，再用1mL移液枪轻微吸出与白膜层靠近的少部分上清液;6)继续用1mL移液枪将白膜层吸出，转移至另一新的15mL离心管中，加入10mLPBS溶液稀释，用吸管充分吹打混匀(目的:尽可能稀释、去除可能混有的PBMC分离液和血浆);7)置入离心机中，1800rpm离心10min;8)弃上清，再加入10mLPBS，吹打混匀，1800rpm离心10min，留取细胞沉淀，即PBMC9)PBMC用PBS溶液重悬后，可根据想要分选的细胞类型，选择特定的荧光抗体marker，进行染色，用于后续分析4.2.流式仪准备(1)流式开机(2)无菌分选流程1)打开Cytometer
