解螺旋陪伴医生科研成长http://www.helixlife.cn1泛素化检测实验方法1.实验原理大多数蛋白均需进行翻译后修饰来扩增蛋白质组的数量，调节蛋白质的稳定性、分布和功能。翻译后修饰包括磷酸化、泛素化、亚硝基化、氧化等等。泛素化是在蛋白质翻译后,通过将泛素分子结合到靶蛋白上,形成多聚泛素链,带有多聚泛素链的靶蛋白可被26S蛋白酶体识别、降解。泛素是76个氨基酸的多肽片段，包含7个赖氨酸残基，允许同时发生聚泛素化反应。在赖氨酸-48聚泛素化会导致其通过28S蛋白酶体降解。然而赖氨酸-63可以改变细胞的功能，包括运输和DNA修复。可见，单一的泛素化会依据其作用位点的不同而产生不同的结果。它和泛素激活酶（E1）、泛素结合酶（E2）、泛素连接酶（E3）和蛋白酶体组成了泛素-蛋白酶体系统（Ubiquitin-ProteasomeSystem，UPS）。UPS是细胞内非溶酶体途径蛋白质降解通路，不仅降解变性、异常或起短暂作用的蛋白质，而且能降解转录因子、内膜蛋白和细胞周期蛋白等天然蛋白，对于维持蛋白质稳定状态、调节细胞程序性死亡和控制细胞周期等过程有重要的作用。UPS还可作用于转录因子及体内的某些信号传导通路，并参与细胞凋亡、主要组织相容性复合体抗原递呈、细胞周期以及细胞内信号传导等多个细胞生理活动，对维持细胞正常生理功能具有重要意义。解螺旋http://www.helixlife.cn/2.实验目的检测蛋白质的泛素化水平。1蛋白A降低蛋白B的表达量1.1蛋白A介导蛋白B降解1.2蛋白A降解蛋白B的特异性1.3蛋白A介导蛋白B降解呈剂量依赖性1.4蛋白A调节蛋白B稳定性2蛋白A介导蛋白B降解位于蛋白酶体系统解螺旋陪伴医生科研成长http://www.helixlife.cn22.2蛋白B降解位于蛋白酶体系统2.3蛋白A介导蛋白B降解位于蛋白酶体系统3赖氨酸XXX位点为蛋白A介导蛋白B泛素化靶位点3.1蛋白A介导蛋白B泛素化3.2赖氨酸XXX位点为蛋白A介导蛋白B泛素化靶位点4蛋白A氨基端与羧基端在蛋白B降解中的作用4.1蛋白A氨基端与蛋白B降解4.2蛋白A羧基端与蛋白B降解4.3蛋白A羧基端与蛋白B泛素化解螺旋http://www.helixlife.cn/3.实验材料3.1.主要试剂（试剂来源仅供参考）试剂来源Cat.No.RIPA碧云天P0013CPMSFBio-RadMSB1001PierceBCAProteinAssayKitThermoScientific232254XLeammli加样缓冲液Bio-Rad1610747β巯基乙醇Sigmaaldrich60-24-2ProteinMarker天能180-6003脱脂奶粉生工A600669WesternBlotStrippingBufferThermoScientific21059ECLWesternBlottingSubstrateThermoScientific32106A/Gmixm...
