实用医学杂志2013年第29卷第9期鲍曼不动杆菌（Acinetobacterbaumanii，AB）是非发酵革兰阴性杆菌，为全球范围内医院感染的重要病原菌之一。我院仅对多黏菌素或米诺环素敏感、对其他抗生素均耐药的泛耐药鲍曼不动杆菌（pan-drugresistantAB，PDRA）分离率约占50％，给临床抗感染治疗和医院感染预防带来严峻挑战，PDBA在国内外其他医院分离率也在30％以上［1］。PDRA对常用抗菌药物耐药的重要原因是产生碳青霉烯酶水解酶。鲍曼不动杆菌能够快速获得多重耐药性的重要原因是可移动耐药基因组在不同菌株间的水平转移。整合子和ISCR1（insertionsequencescommonregions）具有强大的耐药基因捕获功能，可以捕获多种耐药基因并通过接合质粒在不动杆菌不同菌株间水平转移。利用本项目组已建立的G－杆菌耐药机制和传播机制研究平台，本研究选取77株仅对多黏菌素或米诺环素敏感的PDRA，进行整合子I、ISCR1、常见碳青霉烯酶基因等耐药机制研究，ERIC-PCR（enterobacterialrepetitiveintergenicconsensus，ERIC）基因分型方法进行传播机制研究。1材料与方法1．1菌株来源南方医科大学南方医院2011年1－12月，下呼吸道感染患者的痰液中分离的仅对多黏菌素或米诺环素敏感的PDRA（排除重复菌株）共77株，其中23株分离于呼吸科，14株分离于脑外科，22株分离于外科ICU，18株分离于神经内科。利用BDPhoenix100仪器进行进鉴定和药敏试验，头孢哌酮／舒巴坦和米诺环素药敏试验采用K-B法，药敏纸片购自英国OXOID公司。1．2主要仪器和试剂德国Eppendorf公司的PCR扩增仪器，Bio-Rad公司的凝胶成像仪。TaqDNA聚合酶、dNTPs、蛋白酶K、HinfI均为TaKaRa公司产品。Tris饱和酚、氯仿、异戊醇、10％十二烷基磺酸钠（SDS）购自北京鼎国生物技术有限公司。所有引物由上海生工生物工程公司合成。1．3细菌DNA模板制备新培养的细菌经SDS-蛋白酶K裂解后，利用酚－氯仿进行抽提，用TE缓冲液（10mmol／LTris，1mmol／LEDTA）溶解DNA沉淀，于－20℃保存。1．4I类整合子结构研究先进行整合酶I基因扩增，阳性菌株进一步扩增其可变区，可变区阳性的PCR产物进行限制性核酸片段长度多态性（RFLP）分析，1％的琼脂糖凝胶电泳检测并挑选不同谱型的PCR产物送深圳华大基因公司测序，引物、限制性内切酶和反应体系参照文献［2］。1．5ISCR1结构研究先进行ISCR1基因扩增，阳性菌株进一步扩增其可变区即ISCR1相关基因，可变区阳性的PCR产物进行RFLP分析，1％的琼脂糖凝胶电泳检测并挑选不同谱型的PCR产物...
