解螺旋陪伴医生科研成长http://www.helixlife.cn1RNA-FISH实验方法1.实验原理利用荧光标记的特异核酸探针与细胞内相应的靶RNA分子杂交，通过在荧光显微镜或共聚焦激光扫描仪下观察荧光信号，来确定与特异探针杂交后被染色的细胞或细胞器的形态和分布，或者是结合了荧光探针的RNA分子在染色体或其他细胞器中的定位。RNAFISH不单可以定位lncRNA，还增加了区分原始和成熟lncRNA转录物的能力，并由此得以将作用位点与合成位点分开，可在转录事件和成熟lncRNA的位置和耐久性之间添加时间空间信息，是lncRNA分析的有用工具。2.实验目的确定与特异探针杂交后被染色的细胞或细胞器的形态和分布，或者是确定结合了荧光探针的RNA分子在染色体或其他细胞器中的定位。3.实验材料3.1.主要试剂1）通透液（1XPBS/0.5%TritonX-100）：配置50ml通透液，加入5ml10XPBS于40ml水中，再加入250ulTritonX-100并充分混匀；2）预杂交液（3%BSAin4XSSC（柠檬酸钠缓冲液））：配置100ml预杂交液，加入3gBSA于100ml4XSSC中。实验当天新鲜配置；3）杂交液（10%硫酸葡聚糖in4XSSC）：配置10ml杂交液：4ml水中加入2ml20XSSC、4ml25%硫酸葡聚糖。注意充分混匀，实验当天新鲜配置；4）50mlDAPI工作液：50ml1XPBS中加入200mgBSA（乙酰胺），0.5ulDAPI储存液。现用现配，注意避光；5）洗液I（4XSSC0.1%Tween-20）：配置1L洗液I：799ml水中加入200ml20XSSC，1mlTween-20；6）洗液II（2XSSC）：配置1L洗液II：900mlMilliQ-水中加入100ml20XSSC；7）洗液III（1XSSC）：配置1L洗液III：950mlMilliQ-水中加入50ml20XSSC；8）其它：浓盐酸、PBS缓冲液、4%多聚甲醛、无水乙醇、探针、探针混合液、防荧光猝灭剂等。解螺旋http://www.helixlife.cn/3.2.主要仪器1）盖玻片；2）德国Memmert恒温烘箱；解螺旋陪伴医生科研成长http://www.helixlife.cn23）YXQ-LS-30SⅡ立式压力蒸汽灭菌锅，上海博讯实业有限公司4）湿盒；5）钻石笔；6）摇床；7）Leica激光共聚焦荧光显微镜；4.实验步骤4.1.样本准备1）载波片处理1%盐酸酒精充分浸泡盖玻片，加盖，浸泡1h以上。流水冲洗盖玻片（控制流速，勿冲出盖玻片）；灭菌双蒸水洗4-5遍，室温，振荡洗涤；无水乙醇泡3次，每次数分钟；倾去乙醇，放入温度为60℃左右烤箱烘干数小时，高压灭菌烤干；2）收获分化不同时期细胞。解螺旋http://www.helixlife.cn/4.2.固定及透化1）1XPBS洗一次细胞；2）室温，4%多聚甲醛固定10min；3）1XPBS洗细胞，3次，每次1min；4）...
