齐鲁医学杂志2007年6月第22卷第3期MedJQilu'June—o7：!：大鼠骨髓间充质干细胞的培养鉴定及向成骨细胞诱导分化研究刘斌钰，李宁毅，樊功为，金晓明，陈立强(青岛大学医学院附属医院口腔科，山东青岛266003)·215·[摘要]目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的体外培养方法、生长规律及向成骨细胞分化的条件。方法采用全骨髓培养法分离成年大鼠BMSCs，经条件培养液诱导培养后，进行形态学观察及碱性磷酸酶活性、细胞矿化作用、骨钙素(OCN)等的测定。结果原代培养的BMSCs先形成细胞集落，14d时集落融合；传代细胞体积变大，约5～7d传代1次。诱导条件下，细胞碱性磷酸酶活性明显增高，并出现了矿化结节。经过体外成骨诱导的BMSCs表现出增殖、聚集、结节和矿化期的阶段性形态特征。在矿化期OCN表达呈阳性。结论BMSCs易于体外分离培养及扩增，体外成骨定向诱导的BMSCs具有典型的成骨细胞的形态和功能性特征，可以作为骨组织工程的种子细胞。[关键词]骨髓间充质干细胞；诱导分化；细胞培养；碱性磷酸酶；骨钙素[中图分类号]R329．28[文献标识码]A[文章编号]1008—0341(2007)03—0215—04EXPERIMENTALSTUDYOFCULTIVAT10N，IDENTIFICAT10NANDINDUCEDDIFFERENTIAT10NOFBONEMARROWSTROMALSTEMCELLSINTOOSTEOBLASTSINRATSLjUBIN-yU，LfNING-YI，FANGON(1rWEI，etaI(DepartmentofStomatology，TheAffiliatedHospitalofQingdaoUniversityMedicalCollege，Qingdao266003，China)[ABSTRACT]ObjectiveTosetupaprotocolofculturingbonemarrowstromalstemcells(BMSCs)ofratsinvitro，andtostudytheconditionforinduceddifferentiationtoosteoblasts．MethodsBMSCswereisolatedfromadultratsforanchoringcul—ture．Thepassageceilswereinducedtodifferentiateintoosteoblastsinadifferentiationinductionmedium．Thephenotypewasde—terminedbymorphologicalmethod，andlevelsofalkalinephosphatase(ALP)andosteocalcin(OCN)，andabilitytoformmineral—izednoduleswereexamined．ResultsColoniesofBMSCswereformedintheprimarycultureandcontactedtoeachotheratday14．Inthepassageculture，theceilsbecamebiggerthanthoseintheprimarycultureandanewgenerationwasproducedin5—7days．Underinduction，levelsofALPwereelevatedandthemorphologicalchangesofosteoblast，phasesofproliferation，aggrega—tion，nodulationandmineralizationwereobserved．Duringth...
