解螺旋陪伴医生科研成长http://www.helixlife.cn1Transwell小室实验1.实验原理Transwell是一类有通透性的杯状的装置，放入培养板后，分为两室：Transwell小室内称上室，盛装上层培养液；培养板内称下室，盛装下层培养液。上下层培养液以聚碳酸酯膜（PolycarbonateMembrane）相隔。细胞种在上室内，因聚碳酸酯膜有通透性，故可研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。Transwell小室原理图聚碳酸酯膜将高营养的培养液和低营养的培养液隔开，细胞放在含有低营养培养液的上室里，下室放入高营养培养液，这样通过制造营养因子分布的差异，能给细胞一个由上室面向下室面运动的动力，这样在培养箱中培养一定时间后，通过计数小室下室面的细胞数，就能检测细胞的迁移能力。聚碳酸酯微孔膜（PolycarbonateMembrane），膜的孔径可为0.1-12µm不等。根据不同的实验目的及细胞的迁移能力，可以选择不同孔径的膜，用于检测肿瘤迁移和侵袭能力的聚碳酸酯膜可选用5、8、12µm的孔径，常孔径为8µm。若在细胞与聚碳酸酯膜间加入基质胶（主要成分包括：层黏连蛋白、胶原IV等，同时含TGF-β成纤维细胞生长因子、组织纤维酶原活化因子以及其它在EHS肿瘤中自然表达的生长因子等）。基质胶覆盖住8μM的孔，防止非侵袭细胞穿透，侵袭性细胞通过分泌基质金属蛋白酶等物质消化基质胶后穿孔，迁移到小室的下室面，这样便能模拟细胞分泌金属蛋白酶消化细胞外基质，转移至其他组织的过程，从而检测细胞的侵袭能力。有侵袭能力的细胞才可用于Transwell侵袭实验。建议实验前先用明胶酶谱法检测MMPs的表达，特别是MMP-2的表达。解螺旋http://www.helixlife.cn/解螺旋陪伴医生科研成长http://www.helixlife.cn22.实验目的检测肿瘤迁移、侵袭能力。3.实验材料3.1.主要试剂（试剂来源仅供参考）试剂来源Cat.No.MatrigelR&DSystems3432-005-01Transwell板Corning3421结晶紫碧云天甲醇国药集团化学试剂有限公司80080418对于新手，不建议自己买matrigel铺板（对技术和经验要求比较高），可购买预铺有细胞外基质的小室（如BDBioCoat™Matrigel™InvasionChamber，#354480）3.2主要仪器仪器名称来源型号生物安全柜苏净安泰BSC-B000IIA2二氧化碳培养箱Thermo311离心机上海卢湘仪公司TP25-ws显微镜OlympusCKX413.3试剂配制3.3.1完全培养基配制于基础培养基中，加入10%FBS（视细胞的迁移能力，若比较弱，可增加血清浓度），1%双抗，以及其他培养成分（个别细胞需要额外的营养因子）...
