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单核苷酸多态性(SNP)实验(1).pdfVIP免费

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单核苷酸多态性(SNP)实验SNP(SingleNucleotidePolymorphism)即单核苷酸多态性,是由于单个核苷酸改变而导致的核酸序列多态性(Polymorphism)。据估计,在人类基因组中,大约每千个碱基中有一个SNP,无论是比较于度多态性(RFLP)分析还是微卫星标记(STR),都要广泛得多。实验方法原理:SNP(SingleNucleotidePolymorphism)即单核苷酸多态性,是由于单个核苷酸改变而导致的核酸序列多态性(Polymorphism)。据估计,在人类基因组中,大约每千个碱基中有一个SNP,无论是比较于限制性片段长度多态性(RFLP)分析还是微卫星标记(STR),都要广泛得多。SNP是我们考察遗传变异的最小单位,据估计,人类的所有群体中大约存在一千万个SNP位点。一般认为,相邻的SNPs倾向于一起遗传给后代。于是,我们把位于染色体上某一区域的一组相关联的SNP等位位点称作单体型(haplotype)。大多数染色体区域只有少数几个常见的单体型(每个具有至少5%的频率),它们代表了一个群体中人与人之间的大部分多态性。一个染色体区域可以有很多SNP位点,但是我们一旦掌握了这个区域的单体型,就可以只使用少数几个标签SNPs(tagSNP)来进行基因分型,获取大部分的遗传多态模式。实验材料:组织样品试剂、试剂盒:液氮、PBS、GA缓冲液、GB缓冲液、蛋白酶K、无水乙醇、蛋白液、漂洗液等仪器、耗材:离心管、离心机、废液收集管、吸附柱、水浴锅、分光光度计、低温冰箱等实验步骤:一、DNA抽提1.取新鲜肌肉组织约100mg,PBS漂洗干净,置于1.5ml离心管中,加入液氮,迅速磨碎。2.加200μl缓冲液GA,震荡至彻底悬浮。加入20μl蛋白酶K(20mg/ml)溶液,混匀。3.加220μl缓冲液GB,充分混匀,37℃消化过夜,溶液变清亮。加220μl无水乙醇,充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀。4.将上述一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB中,(吸附柱放入废液收集管中)12000rpm离心30秒,弃掉废液。5.加入500μl去蛋白液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心30秒,弃掉废液。6.加入700μl漂洗液GW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心30秒,弃掉废液。加入500μl漂洗液GW,12000rpm离心30秒,弃掉废液。将吸附柱CB放回废液收集管中,12000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液。7.将吸附柱CB转入一个干净的离心管中,加入100μl洗脱缓冲液(洗脱缓冲液应在60-70℃水浴预热),混匀,室温放置15分钟,12000rpm离心30秒。洗脱第二次,将洗脱缓冲液50μl加入吸附柱中,室温放置15...

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