·84·临床口腔医学杂志2004年2月第20卷第2期JClinStornato1．Feb，2004。vo1．20．No．2不同条件下细胞冻存效果比较李洁，刘斌，李焰，娄超，娄皓(1．第四军医大学I：7腔生物教研室陕西西安710032；2．第四军医大学基础部电镜室；3．第四军医大学西京医院耳科)[摘要]目的：通过比较不同条件下冻存细胞复苏后的贴壁率，提高细胞冻存复苏的存活率。方法：在细胞冻存时，同一种细胞设定不同的冻存条件，复苏后观察细胞贴壁率。结果：在三种不同条件下，血清和冻存程序的不同对细胞有较大影响；DMS~)的浓度对细胞影响较小；结论：适当提高血清浓度，严格按照规定的冻存程序冻存可以提高细胞存活率。[关键词]细胞；冻存；复苏；贴壁率[中图分类号]Q813．1[文献标识码]A[文章编号]1003—1634(2004)02—0084—02细胞培养是研究活组织和活细胞的良好方法。细胞一旦离开活体开始原代培养，它的各种生物特性都将发生变化。为保证整个实验能顺利完成，及时进行细胞冻存是十分必要的。但冻存的条件和方法将直接影响到细胞复苏后的生存率。通过对一些细胞进行不同冻存条件的设置，复苏后通过计数方法观察细胞贴壁率来检测细胞成活率。材料与方法1．主要试剂和仪器细胞株由口腔生物教研室提供；液氮储存罐；超低温冰箱；细胞冻存液(DMSO)；0．25％胰酶；10％-20％RPMI一1640或DMEM；进口冻存管等。2．选择8种细胞株培养，常规胰酶充分消化后准备冻存，在冻存前设置多种条件，复苏后以细胞贴壁率和生长曲线来检测细胞成活率。2．1按照不同血清(FBS)浓度进行比较。细胞冻存之前计数，复苏24h后将贴壁细胞消化后重新计数，按照公式计算细胞贴壁率。2．2按保护液(DMS0)的不同浓度，对复苏前后细胞贴壁率(％)进行比较。2．3按照两种不同冻存程序对细胞进行冻存【，一种是阶段降温，先放置在4℃冰箱30min，然后移至一20℃存放4h后，再移至一80℃的超低温冰箱，8-24h后迅速浸入液氮储存罐中。另一种是不严格按照上述程序冻存，先放置一20℃8—12h后移至一80℃存放过夜再移置液氮储存罐中保存。将上述两种条件下细胞复苏后，以1×10／ml接种于24孔培养板，连续培养8d并计数，3-4d后给予换液。测定细胞增殖率。结果1．在同批冻存的细胞中，其他条件相同，对不同血清浓度进行比较，使用的血清浓度高低对细胞的冻存有一定影响，浓度高时细胞复苏后的贴壁率略高。但不超过5％，两种浓度间无显著性差异，见图1。2．使用不同浓度的DMS~)，在同批冻存的细胞中，其他条件相同，10...
