SSR分子标记实验操作及其注意事项SSR(SimpleSequenceRepeats)又称微卫星DNA，是一类由几个(多为1~6个)碱基组成的基序(motif)串联重复而成的DNA序列，其长度一般较短，它们广泛分布于整个基因组的不同位置上，每个座位上重复单位的数目及重复单位的序列都可能不完全相同，因而造成了每个座位上的多态性。SSR标记数量丰富，覆盖整个基因组，而且分布均匀，多态性高，呈共显性遗传，重复性好，操作简便，是一种理想的分子标记技术，被广泛应用于构建基因连锁图分子辅助育种品种鉴定遗传资源的保存等方面。一、试剂配制1.0.2%亲水bindingsilence（现配现用）：1500μL95%乙醇，7.5μL冰醋酸，再加入3μLbindingsilence，混匀后使用。2.0.5%疏水repelsilence（购买后可直接使用）3.TBE母液（5×TBE）：TrisBase,54g;硼酸,7.5g;EDTA(0.5MpH8.0),20ml.搅拌溶化，定容至1000ml，无需灭菌，室温保存，母液的pH值应保持在8.3左右。4.Urea－TBE(一块胶板用量)：5×TBE,12ml;尿素,27g.加双蒸水溶解后定容至51ml，使用漏斗过滤。5.40％丙烯酰胺：丙烯酰胺,380g;甲叉双丙烯酰胺,20g.加热至37℃使之溶解，加水定容至1000ml，用醋酸纤维素滤膜（入Nalge滤器，0.45μm孔径）过滤，棕色瓶避光保存于室温。6.10％APS（过硫酸铵）：超纯过硫酸铵,2g;超纯水,18ml.溶解后，4℃保存。7.TEMED（购买后可直接使用）：电泳级的TEMED可购自Bio-Rad，Sigma或其他供应商。8.Loadingbuffer：去离子甲酰胺,50ml;0.5MEDTA(pH8.0),1ml;二甲苯腈蓝cyanol,0.125g;溴酚蓝,0.125g.混匀后置于4℃保存。9.固定液：无水乙醇50ml，冰醋酸2.5ml，水447.5ml。配制成终浓度为10％乙醇，0.5%冰醋酸的固定液。10.染色溶液(ACS试剂)：无水乙醇50ml，冰醋酸2.5ml，水447.5ml，AgNO31g。配制成终浓度为10％乙醇，0.5%冰醋酸，0.2%AgNO3的染色液。11.显影溶液：15gNaOH，0.5ml甲醛，水500ml。终浓度为3％NaOH，0.1%甲醛。二：DNA提取过程中的注意事项(1)避免试验材料间DNA的交叉污染或外来DNA的污染。使用冷冻干燥叶片法，可以将每个样品在单独的离心管中研磨，研磨使用的小钢珠球最好是一次性的，如果是反复使用的小钢珠球，必须彻底清洗干净使用液氮和研钵研磨叶片组织时，必须在每次研磨前彻底清理干净研钵和研磨棒。(2)试验材料应选取幼嫩组织，因为植物幼嫩组织DNA含量高，且多糖多酚含量少。(3)装入离心管的叶片组织最好不要超过离心管的1/3-1/2，否则会引起细胞裂解不完全，导致产量和纯度下降...
