解螺旋陪伴医生科研成长http://www.helixlife.cn1肿瘤转移模型（尾静脉注射法）1.实验原理肿瘤细胞具备一定的侵袭转移的能力，把肿瘤细胞注射入裸鼠的血液系统内，能够较好地模拟肿瘤细胞脱离原发灶进入到血液循环中的情况，通过观察远处器官（肺、肝等）内转移灶的形成情况，能够判断肿瘤细胞的转移能力。2.实验目的通过构建尾静脉注射肺转移模型，验证肿瘤细胞在体内的转移能力。3.实验材料3.1.主要试剂4-6周龄的SPF级BALB/c裸鼠若干（一般可以雌雄对半，特殊的需要偏向选择，比如研究宫颈癌要选取全雌性，研究前列腺癌要选取全雄性。通常为了避免裸鼠饲养过程中死亡而损失数据，在实验阶段，每组的只数会设置在8-10只；建立模型的预实验可适当减少数量），待接种的细胞株，细胞培养基，0.25%胰蛋白酶-EDTA，胎牛血清，无菌预冷PBS，75%酒精。解螺旋http://www.helixlife.cn/3.2.主要仪器培养皿，生物安全柜，二氧化碳培养箱，倒置相差显微镜，离心机，离心管，移液枪，超净台，注射器4.实验步骤4.1制备细胞悬液预先将细胞接种到培养皿并于37℃、5%CO2的培养箱中培养，待对数生长期的细胞生长达到80-90%，弃去培养皿中旧培养基，用无菌预冷PBS冲洗两遍，加入0.25%胰蛋白酶-EDTA1ml到培养皿中消化细胞，静置约2-5min，用倒置相差显微镜观察细胞消化状态，待镜下细胞出现晒网状空隙时加入2-3ml完全培养基后，用移液枪轻轻吹打，使细胞悬浮，收集细胞悬液至离心管，并使用离心机1000r/min离心5min，弃去上清，用预冷无菌PBS洗两遍，再加入预冷无菌PBS，轻轻吹打细胞沉淀，混匀成细胞悬液，用细胞计数板计数细胞，重悬细胞至密度为1×107个/ml（可根据接种细胞量调整），最终将细胞悬液至于冰上暂存。4.2细胞接种解螺旋陪伴医生科研成长http://www.helixlife.cn2在超净台上，将裸鼠固定在固鼠器内，压住裸鼠尾巴根部，用酒精棉球擦拭尾巴消毒并扩张血管，用1ml注射器吸取单细胞悬液，于尾部中外三分之一处进针，控制注射速度。每只0.1ml，即1×106个（不同的细胞接种量可能不同，需要预实验进行摸索）。4.3结果观察接种后，有条件的可通过活体成像系统定期观察细胞的转移情况。于肿瘤细胞接种4-8周后处死并解剖小鼠，观察肺、肝、淋巴结等脏器有无转移灶，统计各部位的转移灶数目以及大小。对转移灶进行病理取材，置于福尔马林固定后，制成石蜡切片，HE染色后镜下观察。组织也可根据实验需求进行冻存（液氮）。解螺旋http://www.helixlife.cn/5.典型...
