质粒转染大肠杆菌材料试剂：胰化蛋白胨，酵母提取物，琼脂，NaCl，NaOH（调pH），氨苄青霉素，卡那霉素，质粒提取试剂盒仪器：高压灭菌锅，42℃恒温水浴锅，，恒温摇床（37℃,225rpm），无菌培养板，消毒1.5ml离心管，消毒枪头，无菌操作台实验步骤：1.LB培养基的配制：在950ml去离子水中加入:胰化蛋白胨10g酵母提取物5gNaCl10g摇动容器直至溶质溶解.用5mol/LNaOH调pH至7.0.用去离子水定容至1L.在15psi高压下蒸汽灭菌20min.固态培养基LB固体培养基及倒板：（1）.配制：100mlLB培养基加入1.5g琼脂粉（2）.抗生素的加入：高压灭菌后，将融化的LB固体培养基置与55℃的水浴中，待培养基温度降到55℃时（手可触摸）加入氨苄抗生素（终浓度为50μg/ml），以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀。（3）.倒板：一般10ml倒1个板子。培养基倒入培养皿后，打开盖子，在紫外下照10-15分钟。（4）.保存：用封口胶封边，并倒置放于4℃保存，一个月内使用。2.从-70℃冰箱中取200μl感受态细胞悬液，室温下使其解冻，解冻后立即置冰上。3.加入质粒DNA溶液（含量不超过50ng，体积不超过10μl），轻轻摇匀，冰上放置30分钟后。4.42℃水浴中热击45s/90s，热击后迅速置于冰上冷却3-5分钟。5.向管中加入1mlLB液体培养基（不含Amp），混匀后37℃振荡培养1小时，使细菌恢复正常生长状态，并表达质粒编码的抗生素抗性基因（Ampr）。6.将上述菌液摇匀后取100μl涂布于含Amp的筛选平板上，正面向上放置半小时，待菌液完全被培养基吸收后倒置培养皿，37℃培养16-24小时。同时做两个对照：对照组1：以同体积的无菌双蒸水代替DNA溶液，其它操作与上面相同。此组正常情况下在含抗生素的LB平板上应没有菌落出现。对照组2：以同体积的无菌双蒸水代替DNA溶液，但涂板时只取5μl菌液涂布于不含抗生素的LB平板上，此组正常情况下应产生大量菌落。大肠杆菌的扩增1.从LB平板上挑取新活化的单个菌落，接种于3-5mlLB液体培养基中，37℃下振荡培养12小时左右，直至对数生长后期。将该菌悬液以1：100-1：50的比例接种于100mlLB液体培养基中，37℃振荡培养2-3小时至OD600＝0.5左右。2.取上述培养液置于冰中10min，之后转移到已灭菌的50ml离心管中再于冰上放置5min3.于4℃离心，2700rmp，10min，弃上清，收集细菌4.质粒的提取准备大肠杆菌质粒提取盒和扩增的带质粒大肠杆菌培养液5.质粒鉴定（琼脂糖凝胶电泳）质粒转染细胞株材料细胞株、质粒、培养基、链霉素/青霉素（双抗）、FCS（小牛血清...
