第l1卷第9期2(10j年9月。曼黔慝盖曼，VdIINo9Sep200f组织贴壁法培养大鼠主动脉平滑肌细胞的探讨第三军医大学西南医院心血管内科(400038)蒂涛刘建平何国祥吴昊王海东目的：撂计分离、培养走鼠主动脉平滑肌细胞(VSMC)的方法，为研究损伤性血管疾病提供有用的体外研究槿型。方法：用组纽贴壁、反转干调的方法分离、培养走鼠主动脉平滑肌细胞井进行传代培养：采用形态学和抗SMactin免疫组织化学鉴定证实为S'vWIC：结果：细胞呈VSMC特征性“峰”“谷”状生长．历次原代培养经鉴定均为高纯度的vSMc经传代培养至2O代，细胞堆持原有生长性状，细胞活力未见减低。结论：组虮贴壁法培养走鼠主动脉平滑肌细胞具有简便、易行、细胞损伤．--1、活力及纯度高的优点，是矸究损惰性血管疾病良好竹体外研究模型。美键词血管平滑肌细胞细胞培养走鼠分类号Q813l—lR一332血管平滑肌细胞(Vascularsmoothmusclecells，VSMC)异常增殖和迁移是损伤性血管病变形成的关键步骤，直接导致动脉粥样硬化、冠状动脉旁路移植术后移植血管和PTCA术后相关冠状动脉病变处再狭窄的发生llJ。因此，以体外培养VSMC为基础，研究在各种内外因素作用下这些血管病变发生过程中的细胞及分子生物学改变，是最终探明上述血管疾病发病机制的良好体外研究手段J。由于实际工作中血管平滑肌细胞的原代培养较为困难，为此我们在参照国外经验L3·的基础上，结合自已的经验，建立了一种简便易行的原代培养大鼠血管平滑肌细胞的方法。l材料与方法11细胞培养1_l1培养液配制DMEM(美国Gibco公司)，Hepes(15mmol／L)，青霉素(100u／m1)，链霉素(100mg／m1)，优质胎牛血清(原代培养浓度20％，传代培养浓度l0％，美国Hyclone)。1．12培养器Ⅱ25cm2塑料培养瓶(Costar)，培养面积25cm2；直径3．5cm培养皿。1．1_3大虱血管平滑肌细胞培养动物来源：健康Wistar大鼠，由第三军大学实验动物中心提供，雌雄不拘，体重150～180g。动脉取材：断颈法处死Wis—tar大鼠，无茁条件下分离全段主动脉，立即置于含青霉素100u／ml，链霉索100rag／m[的无菌生理盐水中。每次取材2～3只大鼠。贴壁法原代培养：超净·】0工作台上，清除结缔组织，剥除动脉外膜。纵向剖开血管，用眼利弯镊钝性刮除内膜面，以去除内皮细胞，剩余血管中膜组织较薄、透明、韧性好。用含青、链霉素的生理盐水反复冲洗，去除脂滴、血凝块等杂质及可能残留的内皮细胞和外膜成纤维细胞，然后将一次取材的2-3条血管的中膜组织混合在一起，置于无菌培养皿中。...
