细胞周期测定实验细胞计数法：实验方法原理体外培养细胞生长、分裂繁殖的能力，可用分裂指数来表示。它与生长曲线有一定的联系，如随着分裂指数的不断提高，细胞也就进入了指数生长期。分裂指数指细胞群体中分裂细胞所占的百分比，它是测定细胞周期的一个重要指标，也是不同实验研究选择细胞的重要依据。实验材料细胞试剂、试剂盒胰酶甲醇培养液冰醋酸Giemsa染液仪器、耗材CO2培养箱普通显微镜培养皿盖玻片吸管实验步骤一、消化细胞，将细胞悬液接至内含盖玻片的培养皿中。二、CO2培养箱中培养48小时，使细胞长在盖片上。三、取出盖片，按下列顺序操作：PBS漂洗3分钟→甲醇：冰醋酸=3：1固定液中固定30分钟→Giemsa液染色10分钟→自来水冲洗。四、盖片晾干后反扣在载玻片上，镜检。五、计算分裂指数=分裂细胞数/总细胞数×100%展开注意事项1.操作时动作要轻，以免使盖片上的细胞脱落。其他一、Giemsa染液配制称Giemsa粉末0.5g，加几滴甘油研磨，再加入甘油（使加入的甘油总量为33ml）。56℃中保温90-120分钟。加入33ml甲醇，置棕色瓶中保存，此为Giemsa原液。使用时按要求用PBS稀释。一般稀释10倍。BrdU参入法实验方法原理细胞周期指细胞一个世代所经历的时间。从一次细胞分裂结束到下一次分裂结束为一个周期。细胞周期反应了细胞增殖速度。单个细胞的周期测定可采用缩时摄影的方法，但它不能代表细胞群体的周期，故现多采用其他方法测群体周期。BrdU（5-溴脱氧尿嘧啶核苷）加入培养基后，可做为细胞DNA复制的原料，经过两个细胞周期后，细胞中两条单链均含BrdU的DNA将占l/2，反映在染色体上应表现为一条单体浅染。如经历了三个周期，则染色体中约一半为两条单体均浅染，另一半为一深一浅。细胞如果仅经历了一个周期，则两条单体均深染。计分裂相中各期比例，就可算出细胞周期的值。实验材料细胞试剂、试剂盒BrdU甲醇冰醋酸Giemsa染液秋水仙素SSC柠檬酸三钠NaCl仪器、耗材冰箱玻片水浴锅锅盖紫外灯光学显微镜实验步骤一、试剂配制1.BrdU配制BrdU10mg加双蒸水10ml，4℃下避光保存。2.2×SSC配制NaCl1.75g，柠檬酸三钠0.88g，加水至100ml，4℃保存。二、细胞生长至指数期时，向培养液中加入BrdU，使最终浓度为10μg/ml。三、44小时加秋水仙素，使每ml中含0.1μg。四、48小时后常规消化细胞至离心管中，注意培养上清的漂浮细胞也要收集到离心管中。五、常规染色体制片。六、染色体玻片置56℃水浴锅盖上，铺上2×SSC液，距紫外灯管6cm处紫外照射30分钟...
