实验十二、细菌总DNA提取、凝胶电泳检测基本概念：总DNA（totalDNA,genomicDNA）凝胶电泳[实验目的]1.学习细菌总DNA提取的原理和方法2.学习琼脂糖凝胶电泳方法[实验材料]1.菌种自己分离纯化后的细菌菌株2.试剂TE、溶菌酶溶液（20mg/ml）、10%SDS、蛋白酶K（20mg/ml）、5mol/LNaCl酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)、乙醇3.仪器高速台式离心机、紫外检测仪4.其他材料：离心管、无菌吸头、移液器等[实验步骤和过程]（一）细菌总DNAD提取革兰氏阳性菌DNA提取方法(提取基因组DNA)1.3-6ml细菌过夜培养液,5000rpm离心10分钟,弃上清2.加0.5mlTE悬浮沉淀,并加75μl溶菌酶（20mg/ml）溶液，40°C保温30分钟3.加50μl,10%SDS,5μl蛋白酶K（20mg/ml）,混匀,37℃保温30分钟4.加0.75ml,5mol/LNaCl,混匀5.用等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提,5000rpm离心10分钟,将上清液移至干净离心管6.用等体积氯仿:异戊醇(24:1)抽提,静置10分钟，5000转离心10分钟，转移上清到干净管中。7.加2倍体积乙醇沉淀DNA,颠倒混合,室温下静止10分钟，离心沉淀DNA8.70%乙醇漂洗DNA后,吸干,用30-50μlTE溶解DNA,-20℃保存革兰氏阴性菌总DNA提取方法方法一：1.将菌液悬于1.5ml溶菌酶溶液（0.15mol/lNacl,0.1mol/lNa2EDTA,15mg/ml溶菌酶，pH=8）.2.37℃温浴2h，3.加入1.5ml10%SDS（0.1mol/lNacl，0.5mol/lTris，10%SDS，pH=8）反复颠倒混匀10min，10000r/min离心10min，取上清4.用等体积苯酚：氯仿：异戊醇各抽提1次，水相中加入40μl的3mol/l乙酸铵和3ml无水乙醇，-20℃沉淀DNA1h，12000r/min离心10min5.收集DNA沉淀，用100μlTE溶解方法二：1.加入DNA提取液100mmol/l，（Tris100mmol/lEDTA，100mmol/lNacl，1%pvp,2%SDS，pH=8）旋涡混匀2.在摇床上250r/min振荡2h，4℃沉淀DNA1h，13000r/min离心10min收集DNA沉淀3.用100μlTE溶解DNA方法三：1.加入DNA提取液（100mmol/l，Tris100mmol/lEDTA，100mmol/l磷酸钠，1.5mol/lNacl，1%CTAB，pH=8），20μl蛋白酶K（20mg/ml）和500μl溶菌酶（0.15mol/lNacl,0.1mol/lNa2EDTA,15mg/ml溶菌酶，pH=8），37℃温浴2h。2.加入1ml20%SDS，65℃水浴过夜3.加入1/3倍体积饱和Nacl,剧烈振荡，12000r/min离心10min4.取上清，用等体积苯酚：氯仿：异戊醇各抽提1次，水相中加入等体积TE，再加入0.6倍体积的异丙醇室温沉淀DNA2h5.12000r/min离心10min收集DNA沉淀，用200μlTE溶解方法四：1.取20μlTE、20μl饱和酚与无菌小离心管中2.取已经培养好的菌一环到上述离心管中3....
