解螺旋陪伴医生科研成长http://www.helixlife.cn1细胞衰老检测实验（β-半乳糖苷酶法）1.实验原理细胞衰老（cellularsenescence）是指，随着时间的推移或面临外界应激压力时，细胞的正常生理功能和增殖能力发生逐渐地衰退，从而脱离细胞周期的过程。细胞衰老是一种不可逆的生长停滞现象。解螺旋http://www.helixlife.cn/β-半乳糖苷酶是应用最早且最广泛的一种源于溶酶体的衰老标志物，在衰老细胞中能够增加溶酶体生物合成，被认为是细胞衰老特异性的标志物以及衰老检测的金标准。2.实验目的检测细胞衰老情况。3.实验材料3.1.主要试剂细胞衰老检测试剂盒（β-半乳糖苷酶法）3.2.主要仪器光学显微镜4.实验步骤4.1.贴壁细胞：1.吸除培养基，用PBS（或试剂盒里的细胞清洗液）洗涤细胞3遍。2.吸取清洗液，加入固定液室温固定细胞15min。3.吸去固定液，用PBS（或试剂盒里的细胞清洗液）洗涤细胞3次。解螺旋陪伴医生科研成长http://www.helixlife.cn24.吸去清洗液。加入37℃预热的染色液，37℃孵育3-16h或直到细胞呈现蓝色，可用保鲜膜封住培养器皿以防染色液蒸发。5.在光学显微镜下观察和计数：呈现蓝色的细胞为衰老细胞。可以对多个视野进行拍照和计数。若不能及时观察，可吸去染色液，加入PBS（或试剂盒里的细胞清洗液），至于4℃（可保存数天）或加入封片剂封片后，4℃长期保存。4.2.悬浮细胞：1.悬浮细胞：离心收集细胞，用PBS（或试剂盒里的细胞清洗液）洗涤细胞3遍。2.离心，吸去清洗液，加入固定液悬浮细胞，室温摇床上固定细胞15min。3.离心，吸去固定液，用PBS（或试剂盒里的细胞清洗液）洗涤细胞3次。吸去清洗液。4.加入37℃预热的染色液悬浮细胞，37℃孵育3-16h或直到细胞呈现蓝色，可用保鲜膜封住培养器皿以防染色液蒸发。解螺旋http://www.helixlife.cn/5.取染色好的细胞，滴加到载玻片上或六孔板内。6.在光学显微镜下观察和计数：呈现蓝色的细胞为衰老细胞。可以对多个视野进行拍照和计数。若不能及时观察，可吸去染色液，加入PBS（或试剂盒里的细胞清洗液），至于4℃（可保存数天）或加入封片剂封片后，4℃长期保存。4.3.组织切片：1.石蜡切片先按照常规方法进行脱蜡或水化处理。对于冰冻切片可直接进入下一步。以下为脱蜡参考步骤：a)脱蜡前，将组织切片于60℃恒温箱中烘烤2.5h；b)组织切片置于二甲苯中浸泡15min；c)更换二甲苯后再浸泡15min；d)无水乙醇中浸泡5min；e)90%乙醇中浸泡5min；f)80%乙醇中浸泡5min；g)70%乙醇中浸泡5min。2...
