解螺旋陪伴医生科研成长http://www.helixlife.cn1线粒体膜电位检测1.实验原理大量的研究表明线粒体与细胞凋亡密切相关，其中线粒体跨膜电位（MMP）的下降，被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件之一。它发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA断裂）出现之前,一旦线粒体跨膜电位崩溃，则细胞凋亡不可逆转。因此，线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。JC-1也称CBIC2(3)或5,5’,6,6’-Tetrachloro-1,1’,3,3’-tetraethyl-imidacarbocyanineiodide，分子式为C25H27Cl4IN4，分子量为652.23，是一种广泛用于检测线粒体膜电位(mitochondrialmembranepotential)△Ψm的理想荧光探针。在线粒体膜电位较高时，JC-1聚集在线粒体的基质(matrix)中，形成聚合物(J-aggregates)，可以产生红色荧光；在线粒体膜电位较低时，JC-1不能聚集在线粒体的基质中，此时JC-1为单体(monomer)，可以产生绿色荧光。这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。通过JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下降，同时也可以用JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变作为细胞凋亡早期的一个检测指标。解螺旋http://www.helixlife.cn/JC-1单体的最大激发波长为514nm，最大发射波长为529nm；JC-1聚合物(J-aggregates)的最大激发波长为585nm，最大发射波长为590nm。2.实验目的检测细胞的膜电位变化3.实验材料3.1.主要试剂JC-1（可以直接买，如碧园天的C2006）解螺旋陪伴医生科研成长http://www.helixlife.cn23.2.主要仪器流式细胞仪4.实验步骤（来源于碧园天C2006说明书，若购买其他品牌，按操作说明书操作即可）解螺旋http://www.helixlife.cn/4.1JC-1染色工作液的配制：六孔板每孔所需JC-1染色工作液的量为1ml，其它培养器皿的JC-1染色工作液的用量以此类推；对于细胞悬液每50-100万细胞需0.5mlJC-1染色工作液。取适量JC-1(200X)，按照每50微升JC-1(200X)加入8ml超纯水的比例稀释JC-1。剧烈Vortex充分溶解并混匀JC-1。然后再加入2mlJC-1染色缓冲液(5X)，混匀后即为JC-1染色工作液。4.2阳性对照的设置：把试剂盒中提供的CCCP(10mM)推荐按照1:1000的比例加入到细胞培养液中，稀释至10μM，处理细胞20分钟。随后按照下述方法装载JC-1，进行线粒体膜电位的检测。对于大多数细胞，通常10μMCCCP处理20分钟后线粒体的膜电位会完全丧失，JC-1染色后观察应呈绿色荧光；而正常的细胞经JC-1染色后应显示红色荧光。对于特定的...
