6花药和花粉培养(单倍体诱导)目的花药和花粉培养的目的是通过使小孢子或花粉粒反复分裂形成胚状体并获得单倍体植物,或者获得芽的形成,然后通过胚胎发生或芽的生长形成单倍体。其染色体组成可以通过秋水仙碱或再生技术获得可繁殖的同型纯合二倍体。世代交替6.1花药和花粉培养概念花药培养:将花粉发育到一定阶段的花药接种到人工培养基上进行培养,以诱导其花粉粒改变发育进程,形成花粉胚或愈伤组织,进而分化为苗的技术。花粉培养:先将花粉从花药中游离出来,再进行离体培养。共同点:利用花粉(小孢子)染色体的单倍性,培育单倍体植株。6.2培养方法花粉发育时期:四分孢子期、单核期(小孢子期)、二核期和三核期(雄配子期)。其中单核期(尤其中、晚期)是大多数植物花粉诱导的最佳时期。花粉粒发育不同阶段的形态百合成熟花粉粒花粉发育时期的检测:压片法:醋酸洋红;碘-碘化钾染色外形:Differentflowerstagesasusedinantherculture.Stage2istheoptimumstageofdevelopmentforuseintobaccoantherculture6.3培养过程6.3.1花药培养1.材料预处理:低温、花药离心、低剂量辐射、化学试剂(如乙烯利)等。2.表面消毒3.接种4.培养:两条途径(胚状体;器官分化),影响因素(光照、温度等)。6.3.2花粉培养1.花粉的分离①挤压法:机械损伤、释放抑制物质②磁搅拌法③漂浮释放法:要预处理2.培养方法①固体培养②液体培养:刚好没底③看护培养④微室培养:悬滴培养⑤条件培养:培养基中加入花药提取物。看护培养1.将完整花药接种在琼脂培养基上。2.将一片无菌滤纸放在花药上。3.将花粉粒接种在滤纸上。看护组织可以相同,也可以不同。6.4培养基基本培养基:1.MS、H适合双子叶2.B5适合豆科、十字花科3.Nitsch适合芸苔属和曼陀罗属4.N6适合禾本科植物激素种类和浓度细胞分裂素生长素蔗糖和有机添加物高蔗糖浓度(双子叶3%,单子叶6-10%)有机添加物:椰乳活性炭AntherandhaploidplantletsonasolidmediumcontainingactivatedcharcoalAntherandhaploidplantletsonaliquidmediumcontainingactivatedcharcoalAntherandhaploidplantletsonadoublelayermedium.Thesolidlowerpartcontainscharcoalwhiletheupperliquidlayercontainsthegrowthregulators6.5单倍体植株的鉴定花粉植株的倍性:不同倍性来源:核内有丝分裂、畸变核融合;花药壁污染1.形态学鉴定:形态特征、结实性、花粉粒大小和着色、气孔大小和数目等;2.细胞学鉴定3.分子标记鉴定6.6单...