第三章细胞生物学研究方法细胞生物学研究方法•细胞形态结构的观察方法•细胞组分的分析方法•细胞培养、细胞工程与显微操作技术一、细胞形态结构的观察方法•光学显微镜技术（Lightmicroscopy）•电子显微镜技术（Electronmicroscopy）•扫描隧道显微镜技术（scanningtunnelingmicroscopy）（一）光学显微镜技术•普通复式光学显微镜技术（Lightmicroscopy）•相差显微镜技术（Phase-contrastmicroscopy）•微分干涉显微镜技术（Differential-interferencemicroscopy）•荧光显微镜技术（FluorescenceMicroscopy）•激光扫描共焦显微镜（LaserscanningconfocalMicroscope）1、普通光学显微镜技术•结构–光学放大系统：物镜和目镜–照明系统：光源和聚光镜–镜架及样品调节系统•分辨率：指区分开两个质点间的最小距离。–d=0.61λ/NA（NA=ηsinθ）d：分辨率λ：波长NA：数值孔径η：物镜与物体间介质折射率θ：光束进入物镜的半角2、相差显微镜技术•相差显微镜与普通显微镜的区别：–添加“环状光阑”和在物镜后焦面上的“相差板”，偏转的光线分别通过相差板的不同区域，由于相差板上部分区域有吸光物质，使两组光线之间增添了新的光程差，从而对样品不同密度造成的相位差起“夸大”作用。最后这两组光线经过透镜又会聚成一束，发生互相叠加或抵消的干涉现象，表现出肉眼可见的明暗区别。•相差显微镜将光程差或相位差转换为振幅差，即明暗差别。相差显微镜的样品不需染色，可以观察活细胞。–光线通过不同密度的物质时，其滞留程度也不同，密度大则光的滞留时间长，密度小则滞留时间短。3、微分干涉显微镜技术•以平面偏振光为光源。光线经棱镜折射后分为两束，在不同时间经过样品的相邻部位，然后再经过另一棱镜将这两束光汇合，使样品中厚度上的微小区别转化成明暗区别，增加了样品反差且具有立体感。•适于研究活细胞。4、荧光显微镜技术•原理：荧光物质，激发光，发射光•仪器：点光源（高压汞灯），滤色系统•荧光：–自发荧光：如叶绿素、维生素A–诱发荧光：甲醛蒸汽处理诱发细胞和组织中的生物单胺类产生荧光–荧光染料染色荧光•应用5、激光扫描共焦显微镜（二）电子显微镜技术•电子显微镜的基本知识–电镜与光镜的比较–电子显微镜的基本构造–电镜与光镜光路图的比较•主要电镜制片技术–超薄切片技术–负染色技术–冷冻蚀刻技术–电镜三维重构技术•扫描电镜（SEM，Scanningelectronmicroscope）显微镜分辨本领光源透镜真空成...
