Agilent1260HPLC工作原理及简单操作温州医学院遗传学重点实验室4B509室武佳2013.5.14Agilent1260HPLC工作原理及简单操作•培训目的：1.了解HPLC各模块的原理；2.掌握HPLC各模块日常维护的要点；3.掌握开机，关机。Agilent1260HPLC工作原理及简单操作•内容：一、HPLC各模块的原理及维护；二、开机/关机操作；三、讨论；四、评估。一、HPLC各模块工作原理及维护HPLC：高效液相色谱仪（HighPerformancesLiquidChromatography）。由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几个部分组成。工作时储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经样品进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中做相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。溶剂柜泵自动进样器柱温箱FLD检测器DAD检测器馏分收集器关于溶剂HPLC各模块的工作原理及维护•所有溶剂应为HPLC级，水应为二次超纯水；•所有溶剂应经过过滤。过滤水应使用水相滤膜，过滤有机相应使用有机相滤膜，不能混用。每一次滤膜只能用一次，不能重复使用；•如果没有在线脱气机，所有溶剂应经过超声脱气；•水易滋生藻类，避免直接照射，过滤水最好使用不要超过两天；•如果条件允许可向溶剂中加入0.001-0.0001M的叠氮化钠；•注意溶剂的相容性，避免使用不相容的溶剂；•避免使用强酸、强碱或有机氯等腐蚀性溶剂；•在溶剂瓶中的溶剂过滤头可能会堵塞，必要时小心拿下用强酸（35%硝酸）浸泡时，用水冲洗，但不要使用超声处理。在线真空脱气机•在线真空脱气机的管路容量为12ml，压力范围为110Torr-190Torr。•为保证脱气机的良好使用性能，在下述情况下需要用注射器抽洗脱气机管路，每个通道使用不低于30ml的异丙醇。1，新的脱气机或新的管路；2，更换了溶剂，尤其是缓冲盐与有机相之间、两个不相容流动相之间的互换时；3，输液泵关闭了一段时间，或使用挥发性溶剂混合物。HPLC各模块的工作原理及维护关于泵：（四元泵）HPLC各模块的工作原理及维护四元泵工作原理图：在常压下将两种（或多元溶剂）输至混合器中混合，然后用高压输液泵将流动相输入到色谱柱中。因溶剂混合在低压下进行，故称低压混合系统。样品进入系统放空阀阻尼器单向阀主动阀在线真空脱气机高速比例电磁...
