HE染色详细步骤1.小鼠脊髓组织石蜡切片HE染色1.1小鼠脊髓组织取材制备（石蜡切片）1.1.1切片：蜡块放置于切片机进行连续不间断切片（3微米），切好的片段用毛笔小心转移到40-45℃的展片台内的清水上，待几分钟后切片完全没有褶皱，选择组织形状完整并且没有刀痕的片子进行捞片，一个片子可以捞上两片。使用黏附载玻片，吸附能力更强。切片保存于4度冰箱，随时可以用。1.1.2烤片：切片置于65℃烘箱中60分钟，肉眼可观察到石蜡熔化。1.1.3脱蜡至水：切片依次按照下列顺序放置进行脱蜡，清洗液Ⅰ/Ⅱ各10分钟，清洗液Ⅲ5分钟，100%无水乙醇→95%乙醇→80%乙醇→75%乙醇各5分钟，蒸馏水洗片3次，每次5分钟。1.小鼠脊髓组织石蜡切片HE染色1.2HE染色1.2.1滴加苏木素染液覆盖标本染色5分钟，自来水洗10秒。1.2.20.5%盐酸乙醇分化液分化5秒，自来水冲洗30秒。1.2.30.2%氨水返蓝液返蓝30秒，自来水冲洗30秒。（氨水刺激性强，注意通风防护）1.2.4伊红染色2分钟，自来水冲洗5秒。1.2.5脱水、透明、封片：80%乙醇→95%乙醇→100%乙醇各浸洗2-3秒；清洗液Ⅰ→清洗液Ⅱ各透明1分钟；中性树胶封固，光学显微镜下观察、采集图像。HE染色试剂耗材试剂耗材介绍HE染色避坑指南避坑指南1.切片染苏木精后，控制分色时间是关键，应在显微镜下控制进行，一般以细胞核染色清楚（晰）而细胞质基本无色为佳。如果过分延长分色时间将导致染色太浅，应重新染色后再行分色。2.彻底脱去酒精，组织切片需要通过一系列的酒精浓度逐渐脱水，并用透明剂如苯酚、二甲苯等进行透明化。透明化后切片会变得更加清晰，便于染色。3.在染色过程中不要让切片干燥，以免切片收缩、变形，影响神经元形态。4.空气中的灰尘和污染物会对实验产生不利影响，因此在染色过程中，需要避免将切片长时间暴露在空气中，并保持实验室的清洁和卫生。5.在酸性分化液内停留的时间不要过长，分化不可过度，避免使细胞核内该染上色的结构脱色。不需分化处理的苏木精染色时要注意掌握染色时间，以防止组织切片染色背景过深或细胞核、胞质染色不足。
