肌糖元的酵解作用实验目的1.学习检定糖酵解作用的原理和方法2.了解糖酵解作用在糖代谢过程中的地位及生理意义实验原理在动物、植物、微生物等许多生物机体内,糖的无氧分解几乎都按完全相同的过程进行,本实验以动物肌肉组织中肌糖元的酵解过程为例。肌糖元的酵解作用,即肌糖元在缺氧的条件下,经过一系列的酶促反应最后转变成乳酸的过程。肌肉组织中的肌糖元首先与磷酸化合而分解,经过己糖磷酸脂、丙糖磷酸脂、丙酮酸等一系列中间产物,最后生成乳酸。该过程可综合在下列反应式:1/n(C6H5O5)n+H2O→2CH3CHOHCOOH糖元乳酸肌糖元的酵解作用是糖类供给组织能量的一种方式。当机体突然需要大量的能量,而又供氧不足(如剧烈运动时),则糖元的酵解作用暂时满足能量消耗的需要。在有氧条件下,组织内糖元的酵解作用受到抑制,而有氧氧化则为糖代谢的主要途径。糖元酵解作用的实验,一般使用肌肉糜或肌肉提取液。在用肌肉糜时,必须在无氧的条件下进行;而肌肉提取液,则可在有氧条件下进行。因为,催化酵解作用的酶系统全部存在于肌肉提取液中,而催化呼吸作用(即三羧酸循环)的酶系统,则集中在线粒体中,糖元可用淀粉代替。淀粉存在于绿色植物的多种组织中(种子、块茎、干果)。糖元是动物和细菌细胞内糖及其所反应的能源的一种储存形式,其作用与淀粉在植物中的作用一样,故有“动物淀粉”之称。糖元或淀粉的酵解作用,可由乳酸的生成来观察,在除去蛋白质与糖以后,乳酸可以与硫酸共热变成乙醛,后者再与对羟基联苯反应产生紫红色物质,根据颜色的显现而加以鉴定。该法比较灵敏,每毫升溶液含1-5µg乳酸即产生明显的颜色反应,若有大量糖类和蛋白质等杂质存在,则严重干扰测定结果,因此,实验中应尽量除净这些物质。另外,测定时所用的仪器应严格地洗涤干净。试剂和器材1.材料家兔的肌肉2.试剂(1)0.5%糖元溶液(或0.5%淀粉溶液)、液体石蜡、15%偏磷酸溶液、氢氧化钙(粉末)、浓硫酸、饱和硫酸铜溶液。(2)1/15mol/L磷酸二氢钾溶液(pH8.0)1/15mol/L磷酸二氢钾溶液(pH7.4)(3)对羟基联苯试剂;3.器材试管及试管架、移液管(5ml、2ml、1ml、0.5ml)、滴管、量筒(10ml)、玻璃棒、恒温水浴、小台秤、剪刀及镊子、研钵、冰浴、表面皿、橡皮塞。操作方法1.制备肌肉糜:将家兔杀死后,立即剥皮,割取背部和腿部肌肉,在低温条件下用剪刀尽量把肌肉剪碎即成肌肉糜,低温保存备用(临用前...