浙江省第六届大学生生命科学学科竞赛实验记录序号：14实验时间：7月24日8:30－17:00请勿透露学校、教师和个人信息MTT法检测麦冬多糖对HUVEC细胞增殖的影响3【实验结果】表1不同麦冬多糖浓度对H2O2损伤的人脐静脉内皮细胞的影响OPJ-25：麦冬多糖浓度为25μg/mL组；OPJ-50：麦冬多糖浓度为50μg/mL组；OPJ-100：麦冬多糖浓度为100μg/mL组；OPJ-200：麦冬多糖浓度为200μg/mL组。图1不同浓度麦冬多糖对H2O2损伤的人脐静脉内皮细胞的影响【讨论】本次实验数据无明显趋势，考虑可能的原因如下：1、250μmol/LH2O2浓度是依据参考文献，可能并不是本次试验的最佳损伤浓度，还需设计MTT检测双氧水损伤的抑制试验来确定针对本次试验的最佳的H2O2浓度。2、在配制250μmol/LH2O2浓度时，出现失误，用无血清1640培养液配制，应该用含10%胎牛血清的1640培养液配制。【注意事项】1.MTT一般最好现用现配，过滤后4℃避光保存两周内有效，或配制成5mg/ml保存在-20℃长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解，当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了。实验分组吸光度（OD值）生长抑制率（%）正常对照组0.077±0.0060H2O2损伤模型组0.074±0.0084.85OPJ-250.071±0.0107.66OPJ-500.067±0.00113.49OPJ-1000.084±0.008-9.39OPJ-2000.082±0.005-5.50浙江省第六届大学生生命科学学科竞赛实验记录序号：14实验时间：7月24日8:30－17:00请勿透露学校、教师和个人信息2.MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，不能测定细胞绝对数。在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT吸光度最好在0-0.7范围内。3.MTT有致癌性，用的时候要小心，有条件最好带那种透明的簿膜手套。往96孔板加时不避光也没有关系，毕竟时间较短，或者不放心的时候可以把操作台上的照明灯关掉。4.实验时应设置调零孔，调零孔加培养基、MTT、二甲基亚砜。5.注意细胞悬液一定要混匀，以避免细胞沉淀下来，导致每孔中的细胞数量不等，可以每接几个就要再混匀一下。
